星形胶质细胞钙调蛋白对损伤后胶质瘢痕形成作用的实验研究

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目的:探讨钙调蛋白对体外培养星形胶质细胞损伤后增生及胶质瘢痕形成的影响。方法:体外纯化培养星形胶质细胞,机械划痕法构建星形胶质细胞损伤模型,采用激光扫描共聚焦动态观察星形胶质细胞损伤前后钙离子浓度的变化,同时在损伤后应用钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪(TFP)处理,应用免疫组织化学染色方法检测星形胶质细胞增生的主要标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化。结果:(1)体外培养的星形胶质细胞经鉴定,纯度达95%以上;(2)采用机械划痕损伤的方法建立的星形胶质细胞体外损伤模型与国内外其它星形胶质细胞损伤模型中细胞增生的时间和形态特点基本一致;(3)星形胶质细胞损伤后细胞内钙离子浓度迅速上升,2min后明显下降,此后逐渐下降,在15min左右接近基础水平;(4)星形胶质细胞损伤后钙调蛋白抑制剂TFP能够抑制星形胶质细胞GFAP蛋白表达的增加。结论:(1)成功培养出纯度>95%星形胶质细胞;(2)成功构建了星形胶质细胞体外机械划痕损伤模型;(3)星形胶质细胞损伤后细胞内钙离子浓度上升,钙离子浓度上升激活钙离子效应蛋白钙调蛋白,参与细胞胶质增生过程;(4)星形胶质细胞损伤后加入钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪对星形胶质细胞损伤后的GFAP表达有显著的抑制作用,提示钙调蛋白有调控星形胶质细胞损伤后的增生反应及瘢痕形成的作用。
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