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松茸是世界上最著名、最珍贵的野生食用菌之一。松茸是外生菌根真菌,主要与松属植物形成外生菌根,尚不能实现人工栽培。通过液体发酵培养的菌丝体,与子实体有相近的香气和营养成分,能够用来进行食品加工和生理活性物质提取。本文研究了松茸菌丝体液体发酵过程,确立了松茸菌丝体液体发酵条件;通过研究松茸液体深层发酵过程中菌丝体生物量、残糖浓度动态变化过程;比较不同种龄发酵过程的动态变化,确定了最佳接种种龄;根据比较不同初始糖浓度发酵过程动态变化研究的结果,设计中间补糖发酵策略,确定了最优的补糖时间;对松茸菌丝体发酵过程形态变化作出了详细的描述,并讨论了摇瓶转速和种龄对菌丝体形态的影响。
温度22℃,初始pH5.0-5.5菌丝体生长较好,不同的摇瓶装液量对松茸菌丝体生物量的影响不大。转速对菌丝体的生长影响较大,松茸对较高转速引起的剪切力敏感,菌丝体生物量低;在发酵初期时静止培养有利,中后期较低的转速有利。
对比了种龄为6d、9d、11d的种子液发酵过程的动态变化,种龄6d的种子有更好的发酵潜力,确定了6d为最佳接种种龄。
低初始糖浓度明显有利于缩短松茸种子液生长的延迟期,但在发酵中后期时残糖浓度降低菌丝的生长变缓。较高的初始糖浓度发酵初期生物量积累慢,到发酵中后期时发酵液中糖的浓度高,能使菌丝体在较长的时间保持生长。根据发酵过程中碳源的动态变化过程,设计中间补加碳源的发酵工艺。比较不同的补料时间(12d、14d、16d),确定了12d为最佳补料时间,获得高的菌丝体量产出。在发酵罐上进行了实验,验证了试验中发酵工艺扩大生产的可能性。
松茸菌丝体液体发酵主要形成紧密的菌丝球和松散交织的菌丝体絮状物形态。松茸菌丝体形态变化过程可以分为三个时期,菌丝体由单独细小的菌丝,演变成线团,进而演变成菌团,最终形成菌丝体球和松散的菌絮。第一和第二期对菌丝体的生长和形态变化较为重要。