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研究背景与目的：肝炎的发生发展是一个复杂的病理过程,其中病理性免疫反应引发肝组织中众多细胞因子和炎症介质异常分泌发挥了关键作用。花生四烯酸经由5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LO)代谢通路激活的炎性终产物与各种肝损伤密切相关,但5-LO通路在刀豆蛋白A(Concanavalin A, Con A)诱导急性肝炎被激活的调控机制仍远未阐明。本研究采用经典的Con A诱导小鼠T细胞介导的肝损伤,模拟人类自身免疫反应性肝炎。重点探索Con A诱发小鼠肝急性损伤始发阶段,若干关键的细胞因子和炎症介质产生的转录后调控机制,力图为阐明免疫性肝炎急性期病理机制提供实验依据。方法：雄性Balb/c小鼠随机分为5组,每组6只。除溶剂对照组尾静脉注射生理盐水外,其他几组动物均尾静脉注射Con A (20mg/kg),2h处死。对上述损伤肝组织进行microRNAs (miRNAs)表达谱检测及qRT-PCR验证,筛选出差异表达的miRNAs (变化>1.5倍,P<0.05)。通过对差异表达miRNAs的生物信息学预测和分析,推测存在潜在负向调控的“miRNA-靶蛋白”对,并采用肝实质细胞系,在外源性肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor a, TNF-a)与白介素-6(interleukin-6, IL-6)微环境中,通过蛋白免疫印迹法检测转染miRNAs拟似物(mimic)后,靶蛋白的表达情况,进一步验证“炎症因子/miRNA/5-LO通路”这一体系在ConA诱导肝损伤过程中的调控机制。结果：基于本实验室前期研究发现Con A导致小鼠急性肝损伤的同时,炎性细胞因子TNF-a和IL-6显著上调；并且与5-LO催化生成的终产物炎症介质半胱氨酰白三烯(cysteinyl-leukotrienes, cysLTs)显著升高相一致,提示两者间可能存在相关性。使用免疫抑制剂环孢素A(CsA)预给药,可见在缓解ConA所致肝损伤同时,选择性抑制5-LO表达及其终产物cysLTs分泌上调。由此初步证明5-LO通路参与ConA诱导急性免疫性肝损伤的直接作用。MiRNAs芯片及qRT-PCR验证结果筛选出与Con A处理相关的9个差异表达的miRNAs,再使用TargetScan等共8个生物信息学软件,分别与5-LO通路上的潜在靶基因进行一对一的预测和分析,从中筛选出miR-674-5p对靶基因5-LO存在转录后负向调控作用。蛋白免疫印迹结果表明,miR-674-5p mimic稳定转染的小鼠肝癌细胞系Hepa 1-6细胞分别在IL-6刺激1小时、TNF-a刺激4小时出现5-LO表达显著下调(P<0.01)。另有miR-674-5p mimic稳定转染的人肝癌细胞系HepG2在IL-6刺激4小时5-LO表达显著下调(P<0.05)。上述体外实验进一步验证了IL-6相关miR-674-5p下调对5-LO表达增高的快速调控机制。结论：在Con A诱导小鼠T细胞介导的急性肝损伤中,特定地经由细胞因子IL-6下调miR-674-5p而使5-LO表达显著增加,导致cysLTs分泌上升。