家蚕细胞凋亡抑制因子BmAPI5基因克隆与功能研究

来源 :浙江理工大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liaogch
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
细胞凋亡在生物体的生命活动中扮演着重要角色,其过程受到众多基因调控。其中,API5(Apoptosis inhibitor-5)是一种新发现的细胞凋亡抑制因子,能有效阻断细胞凋亡进程,但其结构与已知的细胞凋亡抑制蛋白(Inhibitors of apoptosis,IAPs)并不相同。目前有关API5的研究主要集中在人类癌症相关等方面,因其高水平表达可促进癌细胞发生而倍受关注。通过基因序列的比对分析,在家蚕(Bombyx mori)基因组中发现存在该蛋白的同源基因BmAPI5(Gen Bank编号:XM004927989),但其在家蚕体内的功能与作用至今尚未见有报道。本文从家蚕中克隆获得BmAPI5基因全长c DNA序列,并在对该基因及其蛋白序列作生物信息学分析的基础上,开展基因的时空表达分析以及对家蚕细胞凋亡的影响等研究,获得主要结果如下:1.家蚕BmAPI5基因克隆与表达克隆获得家蚕BmAPI5基因全长c DNA序列,其开放阅读框长1,671 bp,编码557个氨基酸残基,蛋白分子量63.13 k D,等电点6.09。BmAPI5蛋白主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,具有Lxx LL基序和亮氨酸拉链等特征结构域。家蚕BmAPI5与黑腹果蝇和人类同源基因Aac11的氨基酸序列相似性分别为46%和47%。将家蚕BmAPI5开放阅读框序列克隆至原核表达载体p ET-32a中,经大肠杆菌(Escherichia coli)诱导表达获得重组BmAPI5蛋白,并制备其兔多克隆抗体。2.家蚕BmAPI5基因时空表达分别采用实时荧光定量PCR技术和Western杂交技术分析家蚕BmAPI5基因在不同发育时期、不同组织以及微生物感染后的转录与表达水平。BmAPI5基因在家蚕卵、幼虫和蛹中均有不同程度的转录和表达,其中以5龄幼虫的转录水平显著为高。在不同组织中,BmAPI5以脂肪体中的转录和表达水平显著较高。家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)和大肠杆菌侵染均能快速显著诱导BmAPI5基因的转录与表达,其中以Bm NPV的诱导作用较为明显。这表明BmAPI5可能参与Bm NPV-宿主的互作机制。3.家蚕BmAPI5对细胞凋亡的影响在家蚕Bm N细胞中分别构建BmAPI5过表达和抑制表达体系的基础上,分别采用流式细胞技术和Caspase活性检测技术分析BmAPI5表达变化对家蚕细胞凋亡的影响。流式细胞仪检测结果表明,在家蚕Bm N细胞中过量表达BmAPI5基因可显著降低经PBS饥饿诱导的细胞凋亡水平;而抑制表达该基因则可导致PBS饥饿诱导的细胞凋亡水平显著较高。对不同处理的Caspase活性检测结果与流式细胞仪检测结果一致。这表明BmAPI5具有抑制细胞凋亡的功能。本文研究结果不仅可为进一步研究BmAPI5调控细胞凋亡的分子机制提供基础,还能为探明BmAPI5在家蚕-杆状病毒互作中的功能作用以及用于家蚕抗病毒防治提供新思路。
其他文献
甘草次酸是一种天然的抗炎性药物,是由甘草中提取的甘草酸经酸性水解后得到的一种甘草皂甙元。由于传统的口服给药往往使血液中药物浓度大幅度波动,使治疗达不到应有效果,或给治
氮氧化物(NOx)是主要的大气污染物之一,也是《国家环境保护“十二五”规划》中明确的四项约束性指标之一。研究和开发有效的烟气脱硝新技术迫在眉睫。本论文针对生物脱硝的关
  建筑业作为高能耗、高污染行业的代表,如何提高建筑业能源效率,减少对环境的影响,已成为亟待解决的问题。本文利用新疆建筑业2000-2012 年相关数据,对新疆建筑业能源效率问题
  生态安全是基于人类的生态安全,对生态安全评价定量判断便于对生态环境体系进行调控,调和环境与发展之间的矛盾,达到社会、经济与生态效益的共同发展.本文以克里雅河流域
会议
  中亚干旱区的内陆河及其河岸生态系统拥有不可替代的生态服务价值。荒漠河岸林作为干旱区内陆河流域天人植被的主体,是干旱区生物多样性和生产力富集的生态廊道,已成为抵御
会议
目前中国美术史上对历代名家画作有详细描述,佚名作品却只有少数,致使一些优秀佚名画作逐渐被遗忘。本文从宋元时期宗教壁画出发,从多维视野中研究这一时期的古代画工非凡的
光催化降解有机污染物由于无毒、易后处理等优点,逐渐成为研究热点。而层状钛酸盐、铌酸盐以及钛铌酸盐具有层状结构,在适当改性后可以由紫外型光催化剂转变为可见光催化剂。大大利用了太阳光中的可见光,节约了能源,符合绿色化学要求。本文通过高温固相法制备出层状钛铌酸钾(KTiNbO5)作为前驱体,经过酸化、剥离-重组后,制备出了产物钛铌酸纳米片(e-HTiNbO5),并通过不同的金属氧化物MOx(M=Zn,C
  风蚀沙化作为我国西北地区最为突出的自然灾害之一,对该地区内生态安全形成隐患.风蚀过程指风力对地表物质的侵蚀、搬运和堆积过程,是导致干旱半干旱区土壤退化和沙漠化进
会议
  水资源短缺和危机问题已经成为人类生存和发展面临的重要挑战。水资源包括江河流量变化受气候变化、地表综合特征和人类活动综合影响,科学区分自然因素和人类活动的分别影
会议