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帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是中老年人常见的神经系统退行性疾病。其主要临床特征是静止性震颤,肌僵直,姿势反射障碍等。PD的主要病理学改变为黑质(substantia nigra, SN)多巴胺(dopamine, DA)神经元变性缺失,以及alpha-突触核蛋白聚集的路易小体的形成。迄今为止,PD的病因及发病机制仍不清楚。近年来,越来越多的研究发现PD病人黑质中铁含量增加,铁的异常增高和铁诱发的氧化应激反应可能是PD发病中的关键因素。而alpha突触核蛋白是PD特征性病理标志Lewy小体的主要成分,其聚集及由此引起的黑质多巴胺能神经元变性死亡是PD的主要病理改变。前期研究证实铁可诱导alpha-突触核蛋白的表达及聚集,alpha-突触核蛋白的聚集可加重铁对神经元的损伤,提示铁在alpha-突触核蛋白聚集中发挥着重要的作用。迷迭香酸(rosmarinic acid, RA)是一种天然抗氧化剂,它由一分子咖啡酸和-分子丹参素组成,为水溶性多酚类化合物。RA具有抗炎,抗菌,抗病毒,免疫抑制等多种生物活性。我们前期研究证实迷迭香酸对神经毒素6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)及1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion, MPP+)诱导的细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抗氧化应激、抗凋亡、降低黑质铁水平有关。但是其保护作用的分子机制仍不清楚。已经证实迷迭香酸在体外可以通过抗氧化作用来抑制alpha-突触核蛋白纤维的生成,还可以降解已形成的alpha-突触核蛋白纤维。但是迷迭香酸是否可以通过抑制alpha-突触核蛋白的聚集在PD中发挥其保护作用尚不清楚,其对alpha-突触核蛋白的生成及聚集的调节机制也未见报道。因此,本实验在多巴胺能神经细胞SK-N-SH细胞上,应用流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测线粒体膜电位的改变,免疫组织化学检测alpha-突触核蛋白的聚集、实时荧光定量PCR及western blots检测HO-1,alpha-突触核蛋白,IRP1的表达,以期阐明RA对铁诱导的alpha-突触核蛋白聚集的影响及其可能的机制。实验结果如下：1.100μmol/L Fe2+和100μmol/L FAC处理SK-N-SH细胞24h后,细胞线粒体跨膜电位差(mitochondrial transmembrane potential,△Ψm)明显降低(P<0.05)。RA预处理可以阻断上述改变(P<0.05)。2.1mmol/L Fe2+和FAC分别处理SK-N-SH细胞24h,细胞内alpha-突触核蛋白的聚集较对照组明显增多。而10-3和10-4mol/L RA预处理可以拮抗铁诱导的alpha-突触核蛋白的聚集。3. FAC(100μmol/L)和RA(10-4mol/L)单独处理SK-N-SH细胞均可以上调HO-1mRNA及蛋白水平,与对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05)；而FAC/RA共孵育,可以使HO-1mRNA及蛋白水平较FAC处理组进一步增加(P<0.05)。4. FAC (100μmol/L)处理SK-N-SH细胞24h, alpha-突触核蛋白mRNA的表达明显增加,与对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05)。RA预处理后能够显著的抑制FAC诱导的alpha-突触核蛋白mRNA的表达增加(P<0.05)5. FAC (100μmol/L)处理SK-N-SH细胞24h, IRP1的蛋白水平下降,与对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05)。而FAC/RA共孵育,可以使IRP1蛋白水平较FAC处理组明显上升,差别有统计学意义(P<0.05)。上述实验结果表明：高铁可以引起细胞△Ψm的降低,促进alpha-突触核蛋白的聚集,并通过IRE/IRP机制,升高铁诱导的alpha-突触核蛋白mRNA的表达,引起SK-N-SH细胞的损伤。而RA预处理SK-N-SH细胞,在一定浓度下可以部分逆转细胞内高铁造成的△甲m降低,使HO-1的mRNA及蛋白上升,从而抑制铁诱导的alpha-突触核蛋白的聚集,并通过IRE/IRP机制,降低铁诱导的alpha-突触核蛋白mRNA的表达,从而减轻高铁水平对细胞造成的损害。本实验所研究的RA对DA能神经元的保护作用以及对其可能机制的初步探讨,为PD的防治提供全新的研究结果和药物防治的新策略。