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研究目的:观察AML1b基因及其融合基因AML1-ETO对pig7基因启动子转录活性的影响,探讨AML7与pig7的相互作用在白血病发生中的机制,并通过功能性实验阐释pig7对白血病细胞增殖活性的影响。研究方法:AML1b和AML7-ETO表达质粒分别转染及共转染CV-1和293细胞,用Realtime-PCR方法检测上述基因对两种细胞内源性pig7基因mRNA表达水平的影响;构建含AML1b结合位点的pig7基因增强子序列以及相对应的突变位点的荧光素酶报告基因质粒;将表达载体/突变载体与AML1b或(和)AML1-ETO基因瞬时共转染CV-1细胞,分析AML1b、AML1-ETO对报告基因的转录调节作用。构建含有pig7开放读码框(ORF)的慢病毒表达载体pCDH-pig7及含有pig7反义片段的慢病毒表达载体pCDH-anti-pig7,并分别导入白血病细胞,表达pig7基因及干扰RNA片段,研究该基因的生物学功能。结果:转染AML1b的两种细胞系,其内源性pig7基因mRNA表达水平均明显上调;含有转录起始位点上游1511至1503的TTTGTGGAT序列的荧光素酶报告基因质粒的表达活性与共转染的AML1b质粒剂量呈明显的“剂量-效应”关系,荧光素酶表达活性上调最高达3倍(P＜0.05);而AML7-ETO在不同剂量条件下对荧光素酶表达活性调节均无统计学差异(P＞0.05)。在一定剂量范围内,共转染的AML7-ETO可拮抗AML1b的调节作用。应用pCDH慢病毒系统成功构建并包装出pCDH-pig7慢病毒及pCDH-anti-pig7慢病毒,体外感染白血病细胞系Kasumi-1和NB4后,在细胞高表达pig7蛋白的同时,Kasumi-1细胞出现明显的凋亡和分化趋势,而NB4细胞增殖率并无明显变化,但联合应用药物全反式维甲酸(ATRA)作用于NB4细胞后,也表达出明显的促凋亡和分化作用(P＜0.05);当细胞内源性pig7表达受到抑制的同时,Kasumi-1及NB4细胞均对药物表现出不同程度的耐受性(P＜0.05),提示pig7基因产物可促Kasumi-1细胞分化及凋亡,同时可增加其它白血病细胞对药物的敏感性。结论:AML1b能与pig7基因-1511至-1503区域特异性结合,上调pig7基因转录活性,而AML1-ETO可以竞争性与该区域结合,干扰AML1b的转录调节作用。pig7基因产物对高表达AML-ETO的Kasuml-1细胞有促分化及凋亡作用,同时对于其它白血病细胞可在药物协同下发挥抑制细胞增殖的抗白血病效应。