重组人IL-12在CHO-K1细胞中的表达

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IL-12是由巨噬细胞和B细胞产生的一种异二聚体细胞因子,由分子量为40kDa(p40)和35kDa(p35)的两个亚单位经过多对二硫键连接组成.它能够促使活化的T细胞及NK细胞增殖;增加T细胞及NK细胞的细胞毒活性;诱导IFN-γ的分泌;是促使Th1细胞分化、启动细胞介导的免疫反应的一个关键细胞因子,是沟通先天性抵抗力与后天获得性免疫力的桥梁.重组人IL-12(rhIL-12)作为一种药物已经进入抗肿瘤、抗病毒性疾病和过敏性哮喘的临床试验阶段.由于IL-12结构的复杂性,使其无法在E.coli中获得表达,IL-12的真核表达,就成为体外获得IL-12从而对其进行深入理论和临床研究的唯一途径.该研究在本室已有全长IL-12 p35cDNA和p40cDNA基础上,将p35cDNA和p40cDNA分别插入pEE14表达载体,构建了pEE14/p40、pEE14/p35两种真核细胞重组质粒,共转染CHO细胞后,挑取表达IL-12的细胞株,细胞谷氨酰胺合成酶(GS)筛选系统加压扩增后,获得高表达IL-12的工程细胞株.
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