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目的:雄黄(Realgar)是一种含砷中药,临床应用广泛。是国务院在《医疗用药毒性药品管理办法》中特别规定的28种毒性中药之一。由于受传统用药习惯(中药无毒副作用)的影响,而未科学(长期、超量和不规范)合理使用单味雄黄或其复方制剂引起的药源性砷中毒事件时有报道,其中不少是新生儿、少儿滥用所致,其临床表现为全身多系统损害,以神经系统、消化系统、皮肤损害为主。现代研究表明,砷能通过血脑屏障在脑组织中蓄积,引起实验动物空间学习记忆和新事物识别能力障碍。流行病学调查显示长期砷暴露可导致语言、认知、行为、听力及运动方面的障碍。因此,由雄黄引发的砷暴露和累积效应,使含雄黄中成药的安全性问题颇受争议,尤其在儿童用药方面已成为人们关注的焦点,严重的影响了含雄黄中成药的国际声誉。已有研究表明雄黄/砷致神经毒性的机制主要为氧化应激和氧化损伤,而砷是Nrf2的强烈诱导剂,NMDA受体是学习和记忆过程中一类至关重要的受体,但有关Nrf2/ARE信号转导通路和NMDA受体在雄黄致氧化损伤中的作用尚未完全明确,有待于进一步研究。此外,牛黄(Calculus Bovis,CB)是一种天然抗氧化剂,能够拮抗多种毒物诱导的氧化应激性损伤,在中成药中,牛黄常与雄黄配伍,具有配伍解毒的功效。综上,本研究将建立我国现行四大国家标准收载的全部含雄黄中成药信息数据库,以儿童用药为主线,全面系统地对中成药的形状、处方、用法与用量、注意事项等项目进行详细的分类和统计,对发现的问题给予总结并提出合理建议,为含雄黄中成药儿科用药的安全合理使用提供参考。另外,通过体外实验建立雄黄暴露大鼠原代神经元细胞模型,并应用牛黄进行干预,观察其对雄黄所致神经细胞毒性的保护作用,从Nrf2/ARE信号转导通路和NMDA受体的角度对其机制进行探讨,为雄黄或慢性砷中毒的防治及牛黄与雄黄配伍解毒作用机制的研究提供新的思路。研究方法:以现行四大国家标准收载的全部含雄黄中成药作为研究对象,以药品名称、性状、处方、功能与主治、用法与用量、注意事项等建立数据库,在功能与主治项中以成人、涉儿、小儿等作为关键词在字段内进行建立分析数据库。采用SPSS19.0统计软件对调查对象进行构成比或百分数方法进行描述分析,在此数据库基础上对性状、处方、用法与用量、注意事项等项目进行详细的分类统计。体外实验采用新生SD大鼠出生24h之内,进行取脑、分离、纯化与鉴定,计算阳性细胞率大于80%后,用MTT法确定雄黄染毒、人工牛黄预干预的时间、剂量;采用比色法、微量酶标法及TBA法进行LDH、GSH、MDA含量测定、采用Western blot法进行Nrf2、Keap1、HO-1、NR2A、NR2B的蛋白表达水平测定;实验所得数据以均数±标准差标示,用SPSS19.0软件单因素方差分析(One Way ANOVA)以及多因素方差分析(Two Way ANOVA)方法进行多组间差异的显著性检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1、统计结果表明,现行四大国家标准中,含雄黄中成药共有187种,其中涉儿中成药有50种(26.74%),儿科中成药有25种(13.37%)。(1)含雄黄的涉儿和儿科中成药共有5种剂型,按数量排序依次为:丸剂、片剂、散剂、胶囊剂、其他制剂,其中以大蜜丸的数量最多;(2)涉儿含雄黄中成药中只含雄黄1种毒性药材的仅5种,含2种毒性药材为29种,含3种毒性药材11种,而含3种以上毒性药材5种,儿科含雄黄中成药中含3种毒性药材的比例最大(44.00%),其次是含3种以上毒性药材(28.00%);(3)涉儿含雄黄中成药中有39个品种未标明儿童用药剂量,并且含雄黄中成药用法用量中经常出现婴儿、幼儿、小儿等对于年龄划分不明确的描述词占68.00%,出现“遵医嘱”字样共有12个品种,有“酌增”或“酌减”字样共32个品种。涉儿含雄黄中成药用法用量中未标示疗程的占98.00%,儿科含雄黄中成药用法用量中未标示疗程占96.00%;(4)涉儿含雄黄中成药标示注意事项的品种有35个,未标示注意事项的品种有15个,儿科含雄黄中成药标示注意事项的品种有7个,未标注的品种有18个。2、实验结果表明,(1)随着雄黄染毒剂量和时间的增加,神经元活力不断下降,形态发生变化,并存在剂量与时间依赖性效应关系,人工牛黄对雄黄引起的神经元活力下降和形态变化有拮抗作用。(2)雄黄可使神经元内GSH水平显著降低,MDA水平显著增加,人工牛黄对雄黄引起的GSH水平降低和MDA水平增加具有拮抗作用。(3)雄黄可使Nrf2、Keap1、HO-1蛋白表达显著升高,人工牛黄对雄黄引起的Nrf2、Keap1、HO-1蛋白表达水平的升高有拮抗作用;雄黄可使NR2B蛋白表达水平明显降低,人工牛黄对雄黄引起的NR2B蛋白水平降低有拮抗作用;人工牛黄和雄黄对NR2A蛋白表达水平影响不明显。结论:1、含雄黄中成药对于儿童及涉儿用药的剂型设定不合理,毒性药材数量较多,疗程及年龄划分不明确,说明书警示语不完善。2、雄黄可引起神经元的氧化损伤,而人工牛黄对雄黄引起的氧化损伤有拮抗作用,Nrf2、HO-1、Keap1及NR2B为雄黄毒作用和人工牛黄保护作用的敏感靶点。