【摘 要】
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piRNA(Piwi-interactionRNA)是一类结合PIWI蛋白的小RNA，保护基因组免受转座子的危害，维持基因组稳定性。在果蝇卵巢的体细胞和生殖细胞中均存在piRNAs。生殖细胞中piRNA主要由
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piRNA(Piwi-interactionRNA)是一类结合PIWI蛋白的小RNA，保护基因组免受转座子的危害，维持基因组稳定性。在果蝇卵巢的体细胞和生殖细胞中均存在piRNAs。生殖细胞中piRNA主要由AGO3(Argonaute3)与Aub(Aubergine)参与的乒乓扩增产生。 为了深入地分析卵巢生殖细胞中piRNA的形成，我们构建了ago3基因的突变体果蝇，发现ago3突变引起雌性不育，卵巢生殖细胞发育异常，转座子表达水平升高及piRNA数量急剧降低。然后我们构建了表达突变Slicer活性的AGO3的转基因果蝇品系，通过对其的研究我们发现，AGO3Slicer对果蝇的育性、卵母细胞发育、转座子抑制和piRNA生成都是必需的。然后通过高通量测序分析，我们发现AGO3Slicer活性缺失极大地减少了生殖细胞中piRNA的生成。然而，我们发现Slicer活性缺失的AGO3蛋白仍然能够增强ago3突变体中piRNA的反义链偏向，并且使ago3突变体中的piRNA乒乓特性急剧降低。因此Slicer活性缺失的AGO3蛋白同野生型AGO3一样仍然能够抑制Aub:Aub乒乓的进行。 通过进一步的研究，我们发现Slicer活性缺失的AGO3蛋白仍然定位在核周nuage结构上，而Armitage(Armi)蛋白能够在nuage上与其共定位。我们的分析认为Armi蛋白是一个线粒体蛋白，能够从线粒体上靶向到nuage上参与AGO3RISC(RNAisilencingcomplex)的形成。进一步的筛选发现另一个线粒体因子Zucchini(Zuc)对Armi靶向到nuage是必需的。 总之，我们的研究直接验证了AGO3在卵巢中的功能，同时鉴定出了新的参与其功能的因子，使对果蝇生殖细胞中piRNA形成的机制研究又深入了一步。
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