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蛋白质是细胞功能的最终执行者,但每个蛋白质在细胞中并不是独立完成被赋予的功能,而是通常与其他蛋白质相互作用形成大的复合体,在特定的时间和空间内完成特定的功能。可见,蛋白质相互作用是许多重要细胞生理过程的核心内容,确定与目的蛋白相互作用的蛋白,是探究基因功能的关键。
通过测定荧光光谱发现,45℃条件下, HtrA细胞裂解液在4h时间内能将CpcA-PCB的荧光峰完全降解,在1小时内能将CpcB-PCB的荧光峰完全降解。这说明HtrA与色素蛋白的降解相关,是一种色素水解酶。
为寻找与蛋白降解相关的其它基因,本课题通过体外和体内两种方式来研究蛋白之间的相互作用。Synecocystis sp.PCC6803中存在两个nblA基因,本课题利用定点突变技术构建了nblA的突变体,使两个相邻的nblA基因连成通读结构。在体外通过蛋白复合物实验,确认了两个NblB(gll3814、gll0616)基因均不能与CpcA、CpcB、NblA之间形成蛋白复合物;在体内通过细菌双杂交,以pBT-cpcB、pBT-nblA、pBT-cpcA、pBT-cpcA(N-37)为诱饵质粒与PCC6803总基因组文库杂交,得到与诱饵质粒有相互作用的氨基酸序列,通过对测序报告的分析来确定与诱饵质粒发生相互作用的基因。
为比较PecA野生型与缺失型体内重组特性的差异,构建PecA及其缺失体PecA(N-33),通过实验证明缺失33个氨基酸的PecA与完整PecA体内重组特性没有差异。
通过测定荧光光谱发现,45℃条件下, HtrA细胞裂解液在4h时间内能将CpcA-PCB的荧光峰完全降解,在1小时内能将CpcB-PCB的荧光峰完全降解。这说明HtrA与色素蛋白的降解相关,是一种色素水解酶。
为寻找与蛋白降解相关的其它基因,本课题通过体外和体内两种方式来研究蛋白之间的相互作用。Synecocystis sp.PCC6803中存在两个nblA基因,本课题利用定点突变技术构建了nblA的突变体,使两个相邻的nblA基因连成通读结构。在体外通过蛋白复合物实验,确认了两个NblB(gll3814、gll0616)基因均不能与CpcA、CpcB、NblA之间形成蛋白复合物;在体内通过细菌双杂交,以pBT-cpcB、pBT-nblA、pBT-cpcA、pBT-cpcA(N-37)为诱饵质粒与PCC6803总基因组文库杂交,得到与诱饵质粒有相互作用的氨基酸序列,通过对测序报告的分析来确定与诱饵质粒发生相互作用的基因。
为比较PecA野生型与缺失型体内重组特性的差异,构建PecA及其缺失体PecA(N-33),通过实验证明缺失33个氨基酸的PecA与完整PecA体内重组特性没有差异。