论文部分内容阅读
目的：观察黄荆子乙酸乙酯提取物（the acetoacetate extract of Vitexnegundo seed, EVn-50）和顺铂（cisplatin, DDP）及两者合用对人卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP凋亡的影响，探讨EVn-50增敏DDP诱导人卵巢癌耐顺铂细胞COC1/DDP凋亡的机制。方法：1. MTT法检测EVn-50增强DDP抑制COC1/DDP细胞增殖的作用；2.流式细胞术（Flow cytometry, FCM）检测EVn-50、DDP及两者联合作用于COC1/DDP细胞48h后细胞凋亡率的变化；3. Hoechst33258染色检测EVn-50、DDP及两者联合作用于COC1/DDP细胞48h后细胞凋亡的形态学改变；4. Western blot分析EVn-50、DDP及两者联合作用对COC1/DDP细胞蛋白表达变化的影响。结果：1. MTT法显示：不同浓度EVn-50（20、40、60、80、100μg/mL）对COC1/DDP细胞的抑制率不同，同一浓度在不同的时间段（24h、48h、72h）对COC1/DDP细胞的抑制率也不同，呈现时间-剂量依赖性，各药物处理组与空白组比较，均有统计学差异（P<0.05）。计算EVn-50作用于COC1/DDP细胞48h IC50值为56.34μg/mL；2. MTT法还显示：低浓度EVn-50（20μg/mL）与DDP（1、10、30、60、100μg/mL）联合作用于COC1/DDP细胞48h，与DDP（1、10、30、60、100μg/mL）单药组相比，使DDP的IC50值由39.04μg/mL降至26.39μg/mL，耐药逆转倍数为1.5倍；3.流式细胞术（FCM）显示：各组处理COC1/DDP细胞48h后，空白对照组、EVn-50（20μg/mL）组、DDP（30μg/mL）组及EVn-50（20μg/mL）与DDP（30μg/mL）联合组调亡率分别为4.50%±1.30%、9.80%±1.70%、20.50%±3.70%、50.90%±2.90%。各处理组之间有统计学差异（P<0.05）；4. Hoechst33258染色显示：各处理组均出现典型的凋亡形态学改变，如核固缩、核碎裂、染色质边集、凋亡小体形成等，EVn-50（20μg/mL）+DDP（30μg/mL）联合组的凋亡细胞数明显多于两单药组；5. Western blot显示：空白对照组、EVn-50（20μg/mL）组、DDP（30μg/mL）组及EVn-50（20μg/mL）与DDP（30μg/mL）联合组作用于COC1/DDP细胞48h，Caspase-3蛋白表达增加（P<0.05），平均相对灰度值分别为0.984±0.028、1.710±0.150、2.433±0.151、2.825±0.153；各组均有PCNA表达，EVn-50（20ug/mL）组与空白对照组相比PCNA蛋白表达下调（P<0.05），EVn-50（20μg/mL）+DDP（30μg/mL）联合组与DDP（30μg/mL）组相比PCNA蛋白表达下调（P<0.05）；在DDP组（30μg/mL），EVn-50（20μg/mL）+DDP（30μg/mL）组出现了单泛素化修饰的PCNA（Ubi-PCNA），且EVn-50（20μg/mL）+DDP（30μg/mL）组与DDP组（30μg/mL）相比Ubi-PCNA蛋白表达下调（P<0.05）。结论：1. EVn-50具有抑制人卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP增殖作用，呈时间和剂量依赖性；2. EVn-50能逆转人卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP对DDP的耐药性，逆转倍数为1.5倍；3. EVn-50能增强DDP诱导人卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP凋亡作用，其机制可能与EVn-50减少PCNA表达和激活caspase-3相关。