【摘 要】
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薯蓣皂甙元(diosgenin)是合成激素类药物的最重要原料.自1990S后期以来,人工栽培的盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis Wright)是中国薯蓣皂甙元生产的主要原料.该试验以茎段
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薯蓣皂甙元(diosgenin)是合成激素类药物的最重要原料.自1990S后期以来,人工栽培的盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis Wright)是中国薯蓣皂甙元生产的主要原料.该试验以茎段、叶片和根为外植体,以附加20.0g/L蔗糖和8.0g/L琼脂的大量元素减半的MS培养基为基本培养基,研究了盾叶薯蓣的离体植株再生和根癌农杆菌介导的抗虫基因PIN-Ⅱ(马铃薯蛋白酶抑制剂)基因的转化技术.用含pCAMBIA1301-PIN-Ⅱ质粒的根癌农杆菌LBA4404和新鲜的烟草叶片在含BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+As100μm/L液体基本培养基中感染茎段愈伤组织15-25min后,将愈伤组织和烟草叶片一起转到含同样激素及乙酰丁香酮浓度的固体基本培养基上共培养3-4d;然后将愈伤组织转到含羧苄青霉素250mg/L的培养基上除菌10d,再将愈伤组织转到含羧苄青霉素250mg/L和潮霉素50mg/L的选择培养基上培养,30d后再将存活的愈伤组织继代到含羧苄青霉素100mg/L和潮霉素70mg/L的选择培养基上继续培养30d;以生长良好的愈伤组织总DNA为模板,用bar基因引物对其进行PCR扩增,结果为阳性,证明其为转化的愈伤组织.
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