论文部分内容阅读
目的探讨claudin-1基因siRNA转染后对胰腺癌细胞解离及侵袭能力的影响。方法采用claudin-1特异性siRNA转染胰腺癌低转移株PC-1细胞,RT-PCR半定量分析转染效率,用Papanicolaou’S染色法观察细胞解离状态,transwell小室方法分析claudin-1基因siRNA转染后胰腺癌细胞侵袭能力的变化,划痕实验检测claudin-1基因siRNA转染后对胰腺癌细胞迁徙能力的影响。结果RT-PCR:转染48小时后,siRNA组的mRNA表达水平显著降低,与阴性对照组相比下降了82.85%(GeneTools from SynGene计算灰度值),有显著性差异(P<0.01)。细胞解离状态：Papanicolaou’S染色,镜下(200×)观察细胞解离状态,发现阴性对照组胰腺癌细胞PC-1均呈岛样克隆细胞生长,而siRNA转染后48小时的细胞解离状态发生变化开始呈散在单个细胞生长。Transwell小室方法分析侵袭能力：将细胞加入含Matrigel的Transwell上室培养48小时,巴氏染色后镜下观察细胞并计数随机5个视野(200×)内细胞数,发现阴性对照侵袭细胞数分别为17.56±2.33,而转染claudin-1 siRNA后为33.67±2.35,侵袭细胞数明显增加,差异有统计学意义(P=0.000,P<0.05)。Transwell小室方法分析迁徙能力：将细胞加入Transwell上室培养24小时,巴氏染色后镜下观察细胞并计数随机5个视野(200×)内细胞数,发现阴性对照迁徙细胞数分别为16.27±1.28,而转染claudin-1 siRNA后为32.30±1.49,迁徙细胞数明显增加,差异有统计学意义(P=0.000,P<0.05)。划痕实验分析迁徙能力：在划痕后24h,可以看到siRNA组向原始致伤区迁移,而对照组不明显。结论当siRNA转染处理PC-1后,在细胞膜细胞间连接处的claudin-1表达明显减弱,从而导致胰腺癌细胞解离,transwell实验结果证明其侵袭能力相应增强。所以,在仓鼠的胰腺癌细胞中claudin-1的表达变化与胰腺癌细胞的侵袭转移能力密切相关,且成负相关。