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目的:1.明确Gαq蛋白对CD4+T细胞稳态增殖的调控。2.阐明Gαq蛋白调控CD4+T细胞稳态增殖的机制。 方法:1.建立骨髓嵌合鼠。同龄同性别Gαq基因敲除小鼠和wild C57BL/6小鼠进行脱颈处死，取其双下肢完整的股骨和胫骨，置于70％酒精中浸泡3分钟，用无菌的PBS洗3次，转移至无菌的培养皿中，用1ml注射器将骨髓吹出。然后应用红细胞裂解液去除红细胞，进行骨髓单个核细胞计数。分别取出4×106个细胞静脉注射到1000 cGy致死剂量辐照的同龄同性别wild C57BL/6小鼠中进行骨髓移植，建立骨髓嵌合鼠，继续在SPF环境下饲养2个月，取脾脏进行实验。2.分离、纯化CD4+T细胞。同龄同性别Gαq基因敲除小鼠和wild C57BL/6小鼠或同批次的骨髓嵌合鼠的脾脏，经研磨、过滤制成单细胞悬液，应用红细胞裂解液去除红细胞。采用磁珠阳选的方法分离CD4+T细胞。首先将脾脏单个核细胞与生物素标记的anti-CD4在冰上孵育30分钟，离心去除未结合的抗体后，加入亲和素包被的磁珠，冰上孵育30分钟后，应用Mini-MACS分选系统分别纯化CD4+T细胞。纯化的细胞在进行研究前，应用流式细胞术进行纯度鉴定，未达到95％时可用新的分选柱进行再次纯化。3.检测CD4+T细胞稳态增殖及其影响因素。应用上述分选方法分选Gαq基因敲除小鼠和wild C57BL/6小鼠的CD4+T细胞。在体外进行CFSE标记后，以每只小鼠分别给予静脉注射4×106个细胞的剂量，静脉注射给同龄同性别300 cGy亚致死剂量辐照的wild C57BL/6小鼠，在不同时间点，取其脾脏进行检测，应用流式细胞术根据CFSE荧光强度检测细胞的稳态增殖。实验设计如下:取8-12周龄同性别C57BL/6小鼠20只，分成2组，每组10只，均给予300 cGy亚致死剂量辐照。第一组每只静脉注射4×106 CFSE标记的Gαq基因敲除小鼠脾脏CD4+T细胞;第二组每只静脉注射4×106 CFSE标记的wild小鼠脾脏CD4+T细胞;注射后的第2、5天每组取5只小鼠取其脾脏细胞，应用流式细胞术分析CFSE阳性细胞的增殖，并分别进行比较稳态增殖的差异。纯化的CD4+细胞T细胞在进行稳态增殖前及稳态增殖的第2、5天用流式细胞术进行BTLA、CD62L表面标记的检测，并比较表达的差异。 结果:1.稳态增殖前，通过流式细胞仪检测比较，野生型与Gαq缺失型小鼠注射前CD4+T细胞表面BTLA、CD62L的表达无明显差异(P＞0.05)。2.CFSE染色后，通过流式细胞仪的检测比较，2天组中野生型组与Gαq缺失组型小鼠CD4+T细胞增殖无统计学意义(P＞0.05)。5天组Gα q缺失组型小鼠CD4+T细胞比野生组型小鼠CD4+T细胞增殖更多(P＜0.01)。3.通过流式细胞仪的检测比较，2天组中Gαq基因敲除组小鼠和野生型小鼠中CFSE标记的CD4+T细胞表面BTLA的表达无明显差异(P＞0.05)、2天组野生型小鼠CD62L表达明显高于Gαq基因敲除组小鼠(P＜0.01)。5天组Gαq基因敲除组小鼠中CFSE标记的CD4+T细胞表面BTLA、CD62L的表达明显低于5天组野生型小鼠组(P＜0.01)。 结论:1.Gαq蛋白促使CD4+T细胞进行更多更快的稳态增殖。2.Gαq蛋白可通过BTLA、CD62L的表达来调控CD4+T细胞的稳态增殖。