水稻(Oryza sativa L.)PDK基因的分离和功能分析

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:john_cai
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  丙酮酸脱氢酶复合体(PDC)是调控碳代谢动态平衡的主要酶之一,连接糖酵解和三羧酸循环,丙酮酸脱氢酶激酶(PDK)是其负调控子,在控制PDC活性方面起着关键作用,并由此决定生物体碳流量,调控三羧酸循环及细胞呼吸作用。   本研究目的是:从水稻中克隆编码PDK的基因,分析所获得的两个同源基因的表达时空特性;分别构建由自身启动子驱动的反义PDK表达载体,转化水稻愈伤组织,通过对转基因后代植株的鉴定,分析PDK基因表达部分抑制产生的性状变化,进而探索该基因在水稻发育中的功能。本研究主要取得了以下结果:1.从粳稻石狩白毛中克隆得到编码PDK的两个同源基因。2.以粳稻品种石狩白毛幼芽、成熟叶片及穗为材料,RT-PCR和Northern杂交分析两个同源基因表达的时空特性。3.从粳稻石狩白毛中克隆得到PDK1、PDK2的启动子及反义基因,构建以pCAMBIA1380为骨架的反义表达载体,并使之在大肠杆菌和农杆菌中稳定复制。利用农杆菌介导法,将反义表达载体转化粳稻石狩白毛胚性愈伤组织,对抗性植株的潮霉素基因PCR及Southern杂交分析。4.对T0代、T1代及T2代的RT-PCR和Northern杂交分析。
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