【摘 要】
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研究目的三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）由于缺乏ER、PR及HER-2,缺乏有效的治疗靶点,除了化疗之外,无有效治疗方法,因此复发转移率高,预后差。近年来,长链非编码RNA被证实在大多数生命活动中发挥重要功能。LncRNA主要通过影响乳腺癌的发生发展、凋亡、侵袭和转移能力来发挥作用。在本研究中,我们试图找出在TNBC患者中特异调控的临床相关lnc
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研究目的三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）由于缺乏ER、PR及HER-2,缺乏有效的治疗靶点,除了化疗之外,无有效治疗方法,因此复发转移率高,预后差。近年来,长链非编码RNA被证实在大多数生命活动中发挥重要功能。LncRNA主要通过影响乳腺癌的发生发展、凋亡、侵袭和转移能力来发挥作用。在本研究中,我们试图找出在TNBC患者中特异调控的临床相关lncRNAs,旨在揭示lncRNA在TNBC发展中的功能作用和调控机制。本研究通过对三阴性乳腺癌（源自TCGA数据库）的RNA-seq进行生信分析,并结合本单位样本验证筛选出显著差异表达的Lnc-PCIR（LncRNA Positively Correlated with Inflammatory Responses）。通过体内细胞功能学实验及体外裸鼠皮下成瘤及转移实验研究Lnc-PCIR对三阴性乳腺癌细胞系的调控作用,并初步探索其调控机制。研究方法1.对TCGA数据库中三阴性乳腺癌的RNA-seq进行生信分析筛选出在三阴性乳腺癌组织中显著差异性表达的Lnc-PCIR,并通过独立样本检测Lnc-PCIR在癌及配对癌旁组织中的表达量,验证筛选结果,明确其临床意义;2.确定Lnc-PCIR位置、大小,利用RACE实验及Northern blot技术克隆其全长;通过核浆分离实验明确Lnc-PCIR在TNBC细胞中的亚细胞定位。3.筛选实验用细胞系,构建过表达、敲减稳转细胞株及siRNA干扰细胞株,通过体外细胞功能学实验及体内裸鼠实验探索Lnc-PCIR对TNBC细胞生长、迁移、侵袭、皮下成瘤、远端转移的影响;4.利用RNA pulldown技术、质谱技术、RIP技术鉴定Lnc-PCIR相互作用蛋白,利用RNA沉淀及western blot技术进行验证;通过序列缺失法鉴定Lnc-PCIR与互作蛋白的结合区域;研究Lnc-PCIR对互作蛋白mRNA及活性的影响,研究其调控机制。5.使用RNA-seq分析Lnc-PCIR对TNBC细胞基因表达谱的影响,使用GSEA/GO分析Lnc-PCIR下游调控基因与信号通路,研究互作蛋白、下游调控基因与信号通路的作用,具体阐明Lnc-PCIR的分子作用机制。研究结果:1.通过TCGA数据库筛选及独立样本验证,Lnc-PCIR在TNBC中的表达显著上调,且表达量与TNBC预后相关。2.Lnc-PCIR位于13q32.3,仅有一个转录本,其长度为987bp,不具有蛋白质编码能力,属于长链非编码RNA;Lnc-PCIR转录本在细胞浆和细胞核中均有分布,以细胞核为主。体外细胞功能学研究证实Lnc-PCIR显著促进三阴性乳腺癌细胞的生长、迁移和侵袭能力。体内裸鼠实验显示Lnc-PCIR能够显著促进裸鼠皮下成瘤能力和肺转移能力。3.与Lnc-PCIR特异性结合的蛋白有两种:TAB3和PABPC4。Lnc-PCIR的210-507nt（#2）片段介导了与TAB3的N末端的CUE结构域相互作用,而625-987nt（#3）片段是与PABPC4的PABP-1234超家族结构域（11-624aa）结合的关键区域。4.Lnc-PCIR可以调控TAB3的mRNA和蛋白水平,但仅能调控PABPC4蛋白水平。Lnc-PCIR通过TAB3调控影响TNF-α/NF-κB信号通路,促进三阴性乳腺癌的生长。结论Lnc-PCIR作为一种促癌基因,在三阴性乳腺癌表达上调,在体内外均能显著促进TNBC细胞生长、侵袭、致瘤性和转移。TAB3和PABPC4为致癌基因,Lnc-PCIR通过与TAB3和PABPC4结合,抑制PABPC4蛋白的泛素化降解,促进其累积,通过与TAB3mRNA相结合促进了TAB2/TAB3复合物的解离,促进TAB3激活下游的TNF-NF-κB信号通路来发挥调控作用。因此,Lnc-PCIR可能是治疗TNBC的一个潜在靶点。
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背景EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）感染发生于9%15%的弥漫性大B细胞淋巴瘤（Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL）,与临床不良结局有关。尽管对DLBCL的临床和分子研究已有一定进展,但EBV+DLBCL的临床及基因组学特征仍有待研究。方法为进一步阐明EBV+DLBCL的临床及基因组学特征,本研究以多中心、3期、随机、对照临床试验（NCT
第一部分EGFR酪氨酸激酶抑制剂对骨肉瘤生物学活性的影响目的:骨肉瘤（Osteosarcoma,OS）是最常见的来源于骨组织的恶性肿瘤,常发生于儿童和青少年,具有很高的转移潜能。表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）是多种肿瘤发生的驱动因素,针对EGFR的酪氨酸激酶抑制剂对多种类型的实体肿瘤患者表现出令人鼓舞的抗肿瘤活性,然而其对OS作用的研
目的:1、研究中国人群散发性肌萎缩侧索硬化症（sporadic amyotrophic lateral sclerosis,s ALS）患者及对照人群中神经丝蛋白编码基因NEFH/NEFM/NEFL的变异情况,构建蛋白变异图谱,阐明神经丝蛋白编码基因变异尤其是罕见变异在s ALS患者中的负担;2、结合携带变异患者的临床特点,从基因水平及变异位点水平分析其与临床表型的关系,并利用所发现基因罕见变异富
【目的】近年来,研究发现拮抗5-HT6受体能够减少癫痫动物模型痫性放电,并且有助于增强癫痫动物模型的学习记忆能力。但其作用机制尚不清楚。我们利用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品（Lithium Chloride-Pilocarpine,Li Cl-PILO）化学点燃方法制备大鼠癫痫模型,利用RNA转录组测序技术（RNA-Squencing,RNA-Seq）筛选5-HT6受体的下游可能作用靶点。通过使用5-
第一部分基于结构磁共振成像评估遗传性痉挛性截瘫5型中枢神经系统形态及信号特征目的:基于常规及结构磁共振成像观察并评估遗传性痉挛性截瘫5型（spastic paraplegias type 5,SPG5）患者颅脑及脊髓的信号与形态学变化特点,并分析SPG5患者中枢神经系统结构MRI特点与临床指标的相关性。材料和方法:前瞻性搜集来自我校神经科学研究院遗传性痉挛性截瘫患者数据库的SPG5患者17名,选取
原发性肺癌（肺癌）是对人类生命健康危害最大的恶性肿瘤之一,肺腺癌（Lung adenocarcinoma,LUAD）是最常见的组织亚分型。肺癌的早期症状隐匿、不易发现,因此多数患者确诊时疾病已进展到晚期,肿瘤的转移是最为主要的原因之一。外泌体是能够被各类细胞所分泌具有膜结构并携带多种生物活性物质的微小囊泡。近年来,肿瘤细胞分泌的外泌体在调节细胞间通信中的作用激发了学者们的热议。缺氧是肿瘤侵袭的关键
一、研究背景中国的肝癌发病率居世界最高国家之列,无论是发病例数还是死亡例数均占全球的一半以上。由于我国肝癌患者大多发现迟、分期晚,确诊时约仅20%患者可手术切除,而对于大多数患者来说,现有治疗手段非常有限。尽管索拉非尼一直是晚期、不可切除肝癌的治疗金标准,但其对患者生存时间的改善却很有限。免疫治疗在这种情况下应运而生,为肝癌患者带来了曙光。然而免疫治疗低的反应率以及昂贵的治疗费用使得大部分患者望而
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【目的】CRISPR/Cas9文库筛选技术有助于发现参与不同疾病的重要基因和治疗靶点。前期文库筛选发现KDSR基因对白血病细胞的生存至关重要,但有关KDSR在白血病中的作用尚未见报道,且机制不明。本课题拟验证KDSR在白血病中的重要作用,探讨其参与白血病发生发展的可能机制。【方法】1、应用CRISPR/Cas9文库筛选技术在MOLM13和MV4-11细胞中鉴定参与白血病细胞生存的重要鞘脂酶;2、通