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猪伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病毒(PRV)引起的危害生猪养殖业的一种主要传染病,自其流行以来,已造成了巨大的经济损失。2011年以来,该病卷土重来,全国多地猪场在免疫gE基因缺失疫苗的情况下,爆发了猪伪狂犬病。为了解福建省新流行PRV的致病性和遗传特性,本研究从福建省某发生疑似猪伪狂犬病的规模化猪场的病料中分离到一株野生型的伪狂犬病毒,并进行了一系列动物人工感染试验、全基因组测序及生物信息学分析。1 猪伪狂犬病毒FJ-2012毒株的分离鉴定本研究首先鉴定了收集的疑似伪狂犬病的病料,初步确认病原为PRV。随后,将病料研磨上清液接种PK-15细胞进行病毒分离,并进行一系列病毒鉴定试验。试验结果显示PK-15细胞CPE变化具有典型的伪狂犬病毒感染特征;电镜观察可见其病毒粒子具有典型的疱疹病毒形态结构;其对PRV阳性血清具有特异性荧光信号,且荧光信号高于经典毒株Min-A株;测得经纯化过的6代病毒液的TCID50为10-9.40/0.1mL。结果证实我们成功分离到一株伪狂犬病毒,并命名为PRVFJ-2012,表明该猪场存在PRV感染,是造成猪群死亡原因。2 猪伪狂犬病毒FJ-2012毒株的致病性研究为进一步探究PRV FJ-2012的致病性,本研究选用家兔、BALB/c小鼠和伪狂犬抗体阴性猪三种试验动物作为动物模型,以经典Min-A株为参考毒株,进行人工感染试验和显微病理观察。试验结果显示试验家兔FJ-2012毒株组接种后出现典型伪狂犬病临床症状,并于40h出现最高体温42.2℃;试验BALB/c小鼠FJ-2012毒株的LD50为102.69 TCID50,低于经典Min-A毒株的LD50(103.87 TCID50);试验PRV gB抗体阴性猪接种FJ-2012毒株组与经典Min-A毒株组相比,具有高死亡率、高体温变化、明显的临床症状及剖检病变等特点;FJ-2012毒株感染发病猪具有典型的显微病理变化。以上三种动物模型的试验结果均提示猪伪狂犬病毒FJ-2012毒株的致病性高于经典PRV Min-A毒株。3 猪伪狂犬病毒FJ-2012毒株的遗传特性研究为进一步探究PRV FJ-2012基因组的分子遗传特性,本试验采SMRT测序平台进行全基因组测序,随后利用数据库资源,运用生物信息学软件对PRVFJ-2012基因组进行生物信息学分析。试验结果表明该新分离毒株与参考毒株具有广泛的分子差异性,其主要免疫基因、毒力基因和免疫逃逸相关基因存在不同程度的插入、缺失和替换;gB蛋白与经典疫苗毒株存在3处抗原差异,gE蛋白存在多处氨基酸变异,gN蛋白种群间氨基酸同源性差异大。以上结果揭示了 PRVFJ-2012毒株的分子特征,初步讨论了该病毒流行的分子基础,为伪狂犬病毒遗传演化规律提供了有力的参考依据,为下一步研制新型伪狂犬疫苗奠定了科学基础。