蛋鸡感染H9N2亚型禽流感病毒后输卵管中病毒分布及组织凋亡研究

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H9N2亚型禽流感病毒(Avain influenza virus,AIV)在世界范围的禽群中广泛流行。蛋鸡感染H9N2亚型AIV除表现轻度呼吸道、消化道症状导致鸡群零星死亡外,还可造成鸡群产蛋量下降30%-80%,产褪色蛋、畸形蛋、砂皮蛋、软壳蛋,受精率及孵化率下降,对蛋鸡养殖造成巨大的经济损失。发病鸡剖检可见生殖系统中卵泡变形充血甚至液化;输卵管出血,内有白色黏稠分泌物甚至黏连。多年来,国内外研究主要集中在AIV对家禽呼吸系统及消化系统的致病方面,有关AIV对蛋鸡生殖系统致病作用的研究鲜有报道。为揭示蛋鸡感染AIV致输卵管功能异常机理,本研究用H9N2亚型AIV人工感染蛋鸡,real-time RT-PCR检测感染蛋鸡输卵管组织不同部位中AIV病毒载量;采用TUNEL检测法、DNA片断化分析、酶学检测法对感染蛋鸡输卵管进行组织凋亡检测;HE染色观察输卵管组织病理学变化。试验结果如下:1.人工感染9只健康产蛋高峰期非免蛋鸡H9N2亚型AIV,设3只为对照组。感染后第3d、5d、7d分别颈部放血处死3只蛋鸡。按输卵管漏斗部、膨大部、峡部、子宫部和阴道部取材。Real-time RT-PCR从鸡输卵管膨大部、峡部、子宫部和阴道部均检出AIV,且各部位病毒载量差异显著(P<0.01)。其中以子宫部和膨大部病毒载量最高,分别达5.52×104±3.14×103copies/μL和5.27×104±3.55×103copies/μL。2.采用TUNEL、Caspase-3酶活性检测及DNA Ladder分析3种方法检测H9N2亚型AIV感染蛋鸡输卵管组织凋亡。TUNEL显示H9N2亚型AIV感染蛋鸡可诱导输卵管膨大部、峡部、子宫部、阴道部发生组织凋亡,且膨大部和子宫部组织凋亡明显。H9N2亚型AIV感染蛋鸡输卵管组织中Caspase-3酶活性较健康鸡输卵管组织升高。DNA Ladder分析发现H9N2亚型AIV感染蛋鸡可诱导输卵管膨大部、子宫部组织细胞发生凋亡,且子宫部发生的凋亡较明显。组织凋亡检测证实H9N2亚型AIV感染蛋鸡可诱导输卵管组织细胞发生凋亡,其中以膨大部、峡部和子宫部组织凋亡明显。3. HE染色发现蛋鸡感染H9N2亚型AIV后输卵管组织主要受损伤的部位为膨大部、峡部和子宫部。膨大部可见大量上皮细胞脱落坏死,炎性细胞侵入腺体、腺上皮细胞脱落及腺体溶解;峡部腺体溶解、轮廓不清;子宫部浆膜上皮断裂,腺体溶解,组织充血出血。综上所述,本研究证实了蛋鸡感染H9N2亚型AIV后输卵管组织中AIV病毒载量与输卵管组织损伤存在明显的正相关。
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