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研究背景:子宫肌瘤(human uterine leiomyomas)是多发生于生育期妇女的一种对雌孕激素敏感的良性肿瘤,除了可引起月经紊乱、经量过多等症状,更是引起子宫全切术的常见病因。已知遗传因素、性激素、生长因子等在子宫肌瘤的形成与生长中起重要作用,但到目前为止,子宫肌瘤确切的发病机制尚未完全明确,治疗上以手术治疗为主,保守治疗效果欠佳,因此探索其发病的分子及细胞机制将有利于疾病的保守治疗。最新的研究发现,非编码小RNA(micro RNA,miRNA)在子宫肌瘤发生中起着非常重要的调控作用。2012年,Boryana等通过高通量测序的方法发现,超过50种miRNAs在子宫肌瘤中表达异常,但是迄今为止其中多种miRNAs表达的定量改变及相应靶基因的鉴定的报道比较少。因此特设计本课题,结合目前研究现状,我们从高通量分析中确定有表达异常但未见相关定量分析研究的miRNAs中,随机选定miR-135b、miR-217、miR-363、miR-451、miR-490、miR-590等6种miRNAs作为研究对象,对这些miRNAs进行差异表达的定量分析及靶基因鉴定,争取为子宫肌瘤的保守治疗提供基于miRNA方向的新靶点。方法:在本次实验中,我们首先使用ABI公司的micro RNA定量试剂盒进行6种miRNA的荧光定量分析,再通过miRNA靶基因预测的网站Target Scan对定量分析有变化的miRNA的前三位靶基因进行预测,并采用RT-PCR方法进行靶基因的定量分析。最后对有定量变化的靶基因运用荧光霉素报告基因实验系统验证靶基因的真实性。结果:(1)和瘤旁组织相比,肌瘤组织中miR-363上调5.2倍、miR-490上调6.2倍、miR-135b上调4.9倍,miR-217下降19%、miR-590下降23%、miR-451下降33%。(2)和瘤旁组织相比,肌瘤组织中miR-363有两个靶基因(FNIP1和SLC12A5)表达水平显著降低,miR-135b有一个靶基因(NR3C2)表达水平显著降低,miR-590有两个靶基因(ZNF367和YOD1)的表达水平显著升高;其余13个候选靶基因表达未观察到明显变化。(3)上述五种表达变化的靶基因,经荧光霉素报告系统验证,最终证实PNIP1、NR3C2、ZNF367分别为miR-363、miR-135b、miR-590的靶基因,可能在肌瘤发生发展中发挥作用。结论:综上所述,本实验中6种miRNAs均观察到差异表达的定量改变,但进一步靶基因鉴定最终仅确定了PNIP1、NR3C2、ZNF367分别为miR-363、miR-135b、miR-590的靶基因,相关性分析显示这三个靶基因表达均与相应的miRNA呈显著的负相关,符合miRNA是通过抑制靶基因起作用的这一规律。以上提示我们尽管多种miRNA表达可发生变化,但可能不是每种miRNA对子宫肌瘤的发生发展均可发挥作用,通过实验确定子宫肌瘤中的miRNA及其靶基因,可以为子宫肌瘤的发病机制及治疗研究提供分子机制方面的依据,有助于研究子宫肌瘤的保守靶向治疗,降低手术率。