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背景和目的胃癌的发病率与死亡率在恶性肿瘤中高居前列,其中,肿瘤进展和远处转移是胃癌患者死亡的主要原因之一。Wnt信号通路是一类对胚胎发育及细胞的增殖分化具有重要调节作用的信号传导系统并且成为了癌症生物学的研究热点,研究发现胃癌的发展过程中也出现了Wnt信号的异常,然而,在有关Wnt信号通路与胃癌的恶性程度、转移和预后方面的研究罕有报道。本课题以多种胃癌细胞株以及胃癌临床标本与病例资料为研究对象,对Wnt信号通路中关键分子TCF-4(T cell factor 4,基因TCF7L2)及其调控的靶基因ITF2(immunoglobulin transcription factor2)和CD44v9在胃癌中的表达水平和发挥的作用进行初步探讨,并且就以上各成分在胃癌中的异常表达及其与癌细胞的侵袭和淋巴结转移情况进行行性的研究和相关性分析,以获得切实的研究资料,使Wnt信号途径与胃癌发生发展,特别是与侵袭和转移的关系形成更为可信的论证,进而为胃癌的发病机制、早期诊断、预后判断、治疗方法的选择等提供新的理论依据。材料和方法本实验采用细胞划痕试验检测胃腺癌细胞株MGC-803、MKN-45、SGC-7901、HSC44-PE和44As3的转移能力：通过western blot检测包括正常胃上皮细胞GES-1在内的各细胞株中TCF-4表达水平；构建TCF-4质粒表达体系以及使用Wnt信号通路小分子抑制剂iCRT-14,分别作用于TCF-4表达低水平细胞和TCF-4表达高水平细胞；通过划痕试验验证Wnt信号通路激活状态的改变对肿瘤细胞转移侵袭活性的影响；最后,收集安徽医科大学附属省立医院病理科存档的胃癌(腺癌)大标本蜡块,经免疫组化检测83例胃癌原发灶组织、47例淋巴结转移灶和20例良性胃上皮组织中TCF-4、ITF2和CD44v9的表达情况,并分析各数据之间的相关性以及各自与临床各参数关系。结果一、TCF-4、ITF2和CD44v9在胃癌中的表达情况：1.TCF-4、CD44v9在83例胃癌组织与20例良性组织中的表达情况。TCF-4在胃癌中的表达强度明显高于良性组织,两者间差异有统计学意义(Z=-3.829 p=0),同样的,在免疫荧光实验组发现,该蛋白在胃癌中的荧光强度明显高于癌旁组织和胃炎组织(P<0.05),其在淋巴结转移灶中的表达与原发灶无明显差异(Z=-0.239,P=0.811)；CD44v9在良性组织中的表达量明显低于胃癌原发灶(Z=-2.547,P=0.011),其在淋巴结转移灶中的表达量明显低于原发灶(Z=-4.498,P=0)；同时,本实验在83例标本中的42例原发灶检测中发现,ITF2蛋白在胃癌中的表达强度明显高于良性组织,两者间差异有统计学意义(Z=-2.337,,P<0.05)。淋巴结转移灶中染色强阳性率明显高于原发灶(χ2=7.398,P=0.005)。二、TCF-4、ITF2表达水平与胃癌细胞的转移侵袭能力的关系：1.培养5种胃癌细胞株MGC-803、MKN-45、SGC-7901、HSC44-PE和44As3,经细胞划痕实验发现,44As3细胞的转移能力最高,SGC-7901细胞最低；经western blot检测结果发现,TCF-4蛋白在44As3细胞中表达水平最高,而在SGC-7901细胞中表达最低,提示TCF-4蛋白与胃癌细胞的转移能力相关。2.使用TCF-4表达质粒转染进入SGC-7901细胞后,细胞的TCF-4表达增高,其转移能力也明显增加：同时,44As3细胞在Wnt信号通路小分子抑制剂的作用下,随着药物浓度的增加,其下游靶基因ITF2的表达水平呈抑制趋势,特别是当药物浓度达到25nmol/ml,并且细胞转移能力随着药物的增加也相应减弱(P<0.05)。3.经western blot检测44As3、HSC44-PE和GES-1细胞中ITF2蛋白表达水平,发现转移能力较高的44As3细胞ITF2的水平也较高,且均高于GES-1。三、TCF-4、ITF2和CD44v9表达水平与其他临床参数之间的关系：1.TCF-4在伴随有淋巴结转移的病例中的表达量明显高于无转移病例,且随着肿瘤浸润深度、TMN分期以及肿瘤大小的升高而升高(P<0.05)；但与年龄、性别、肿瘤部位和分化程度差异均无统计学意义。2.CD44v9在伴随有淋巴结转移的病例中的表达量明显高于无转移病例,且随着肿瘤浸润深度、TMN分期的升高而升高(P<0.05)；但与年龄、性别、肿瘤大小、部位以及分化程度差异均无统计学意义。3.ITF2在伴随有淋巴结转移的病例中的表达量明显高于无转移病例,且随着肿瘤浸润深度、TMN分期的升高而升高(P<0.05)；但与年龄、性别、肿瘤大小、部位以及分化程度差异均无统计学意义。结论一、在基础实验中,发现具有高转移能力的细胞拥有TCF-4的高表达水平,反之低水平表达,经外界条件改变Wnt信号通路激活水平,亦能发现肿瘤细胞侵袭能力改变。二、Wnt途径的下游关键因子TCF-4在胃癌组织中表达明显上调,表明Wnt途径在胃癌中处于激活状态。同时,TCF-4的表达与肿瘤的侵袭转移密切相关。三、胃癌中Wnt途径的激活促使转录因子TCF-4活化,并通过其靶基因ITF2、CD44v9使胃癌细胞具有较强的侵袭性和转移能力,进一步提示该通路的蛋白成员可能参与胃癌的发生和发展,并可能成为胃癌进展预后的监测指标。