IL-27对U937细胞的生物学行为的影响

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白细胞介素-27(interleukine27,IL-27)是2002年发现并命名的一种新的细胞因子,它与IL-12以及另一种新发现的细胞因子IL-23共同组成IL-12分子家族,具有复杂的生物学功能,在抗感染免疫、抗肿瘤免疫、自身免疫病中发挥着重要的作用。   IL-27作为IL-12家族的成员,其抗肿瘤作用一直是广大学者关注的焦点。研究发现IL-27可以通过许多不同的机制发挥抗肿瘤作用,包括CD8+T细胞的特异性杀伤、诱导机体细胞分泌IFN-γ、抑制血管生成、活化NK细胞;最近有研究证实,IL-27可以不依赖免疫细胞发挥直接的抗肿瘤作用,这些实验证据都提示了IL-27可以作为一种新的有效的抗肿瘤药物。   目前,IL-27的抗肿瘤作用的研究主要是在实体瘤方面。而IL-27对血液学肿瘤的作用机制尚不清楚。我们前期的实验研究发现,IL-27受体WSX-1和gp130在AML尤其在AML-M5(急性单核细胞白血病)病人高表达,用人急性单核细胞白血病细胞株U937为研究对象,我们发现rhIL-27能够诱导U937细胞产生抗肿瘤性细胞因子TNF-α和IL-12,抑制U937细胞增殖并诱导细胞凋亡。本研究就是在前期实验的基础上进一步探讨IL-27的抗肿瘤作用机制。   研究目的:   一、了解rhIL-27对U937细胞增殖的影响;   二、检测rhIL-27对U937细胞中促凋亡基因bax、p53的mRNA水平表达的影响;及对U937细胞中凋亡相关蛋白caspase3的表达和活性的影响;   三、检测rhIL-27对U937细胞中的MHCⅠ类分子,协同刺激分子CD86和黏附分子CD54表达的影响;   实验方法:   一、MTT比色法测定细胞的增殖抑制率;   二、以不同浓度的rhIL-27刺激U937细胞,TRIzol法提取RNA,逆转录成cDNA,分别采用荧光定量PCR,RT-PCR测定caspase3,Bax,P53的mRNA表达水平;caspase3活性试剂盒测定casp3的活性,   三、荧光定量PCR法测定MHCⅠ类分子(HLA-A,HLA-B,HLA-C,)及β2微球蛋白和CD86,CD54的表达,流式细胞检测CD86,CD54在细胞表面的表达。   实验结果:   一、MTT实验结果表明,rhIL-27能显著影响U937细胞的增殖(以阿糖胞苷为阳性对照),并且可以和阿糖胞苷产生协同的增殖抑制作用;   二、PCR及荧光定量PCR结果显示:rhIL-27可以显著诱导U937细胞中促凋亡基因Bax、P53的表达(P<0.01),并呈现剂量相关性,在剂量较小的时候随着rhIL-27浓度的增加而增加,浓度为40ng/ml时,作用最大;rhIL-27还可以诱导U937细胞中凋亡相关蛋白caspase3 mRNA水平的表达,增加caspase3的活性,与rhIL-27浓度及处理时间有关,浓度为40ng/ml,作用48小时达到最大,实验组与对照组相比具有显著性差异(P<0.05);   三、rhIL-27可以诱导U937细胞中MHCⅠ类分子(HLA-A、B、C)、β2微球蛋白、协同刺激分子CD86及CD54的表达,在rhIL-27浓度为40mg/ml时,作用达到最大;   结论:   1.rhIL-27直接抑制U937细胞的增殖,还可以和阿糖胞苷产生协同的U937细胞增殖抑作用;   2.rhIL-27可以诱导U937细胞促凋亡基因Bax、p53的mRNA水平的表达增加,从而诱导肿瘤细胞中凋亡通路的激活,提示:U937细胞的增殖抑制可能是由于凋亡途径的激活所致;凋亡下游信号蛋白caspase3表达和活性的测定,进一步证实rhIL-27可以诱导U937细胞凋亡,产生增殖抑制。   3.rhIL-27可以诱导U937细胞中提呈内源性抗原的MHCⅠ类分子的表达,增加了肿瘤细胞对CTL的敏感性;rhIL-27可以诱导U937细胞表面的CD86、CD54的表达,为CTL和肿瘤细胞的识别提供协同刺激信号;提示了rhIL-27可以依赖CTL对U937细胞发挥抗肿瘤作用。
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