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目的： 1.克隆土拨鼠α干扰素和β干扰素基因，建立新的土拨鼠α干扰素基因分型方法，分析急性和慢性土拨鼠肝炎病毒感染的土拨鼠肝细胞中不用型别的α干扰素表达谱。 2.克隆中国旱獭α干扰素家族基因，对所克隆中国旱獭α干扰素基因作出分析和分型，体外检测其生物学活性。 3.利用克隆的土拨鼠和中国旱獭家族干扰素在动物模型上探索慢性乙型肝炎有效的干扰素治疗方案和策略。 方法： 1.利用分子克隆技术对土拨鼠α、β干扰素基因进行克隆，得到各种不同型别的土拨鼠α干扰素基因。 2.PolyIC体外刺激正常和慢性土拨鼠肝炎病毒感染的土拨鼠外周血单个核细胞，研究其表达的α干扰素的生物学活性，调查正常土拨鼠外周血单个核细胞受.PolyIC刺激后α干扰素的基因的表达谱。 3.利用已知序列和基因型的土拨鼠α干扰素克隆质粒，建立基于土拨鼠α干扰素基因序列限制性长度多态性的土拨鼠α干扰素基因分型方法。 4.提取急性和慢性土拨鼠肝炎病毒感染的土拨鼠肝组织mRNA，RT-PCR扩增土拨鼠α干扰素基因，分子克隆后调查急性和慢性感染的土拨鼠肝细胞中α干扰素的表达谱。 5.利用分子克隆技术对中国旱獭α干扰素家族基因进行克隆，并对所克隆的系列基因进行分型。 6.将所克隆的全部型别中国旱獭α干扰素基因亚克隆到真核表达载体，转染BHK细胞作瞬时表达，收集细胞培养上清作病毒保护试验，检测中国旱獭α干扰素基因表达产物的生物学活性。同时在不同种属细胞上检测中国旱獭α干扰素的生物学活性，调查中国早獭α干扰素生物学活性有无种属特异性。 7.选取2个代表型别的中国旱獭α干扰素基因，将其克隆到原核表达载体，诱导α干扰素的表达，纯化后检测干扰素的生物学活性。 结果： 1.获得36个土拨鼠IFN-alpha基因克隆，测序后分析，有10个克隆是新基因，其中2个为假基因，这些基因与GenBank土拨鼠IFN-alpha基因相对应的型别在核苷酸水平有极高的同源性，都在98％以上。另外获得了土拨鼠IFN-beta部分基因的克隆。 2.建立了土拨鼠IFN-alpha基因限制性长度多态性分型方法，分型准确。 3.PolyIC刺激体外培养的正常和慢性土拨鼠肝炎病毒感染的土拨鼠外周血单个核细胞后，培养上清中表达的α干扰素的生物学活性有显著差异，正常动物的活性高，慢性感染的活性较低。 4.急性和慢性感染的土拨鼠肝细胞中α干扰素的表达谱明显不同于正常动物的表达谱，假基因表达所占比例大。 5.克隆了中国旱獭IFN-alpha家族的基因，全部112个克隆中有18个独立不重复序列，其中的14个序列来自于4次以上相对独立的PCR连接产物，将它们分为14个基因亚型，其中8个是功能基因，6个是假基因。 6.中国旱獭IFN-alpha家族的基因真核表达后作病毒保护试验，8个是功能基因都有生物学活性，6个是假基因没有生物学活性。中国旱獭IFN-alpha的生物学活性有种属特异性。 7.原核表达的中国旱獭IFN-α5基因产物有抗病毒生物学活性。 结论： 1.新建立的土拨鼠IFN-α基因分型方法可用于分析土拨鼠不同组织中IFN-α的基因表达谱，以利于研究病毒感染过程中个型α干扰素的生物学作用。 2.中国旱獭IFN-α家族至少有14个基因亚型，这些基因的克隆可应用于中国旱獭HBV动物感染模型，进行干扰素基因治疗和研究干扰素治疗策略。 本研究的创新点 1.在国际上首次建立了土拨鼠IFN-α限制性长度多态性基因分型方法，并用于作土拨鼠不同组织中IFN-α表达谱的分析。 2.在国际上首次克隆了土拨鼠IFN-β部分基因和一些新的土拨鼠IFN-α基因。 3.在国际上首次克隆了中国早獭IFN-α家族基因并进行基因分型。 本研究的意义 1.本研究建立的土拨鼠IFN-alpha基因限制性长度多态性分型方法，分型快速准确、十分经济。可广泛用于不同WHV感染类型土拨鼠不同组织中IFN-α的基因表达谱的调查分析，研究干扰素的抗病毒机制。 2.本研究对中国旱獭IFN-α家族基因进行克隆、分型及生物学活性检测，可应用于中国旱獭HBV动物感染模型，为筛选有效的干扰素、基因治疗及干扰素治疗策略提供了丰富的材料和实验依据。