横纹东方鲀肠道内产河豚毒素细菌的筛选胜利油田原油组分的分析及石油降解菌的筛选

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河豚毒素(Tetrodotoxin TTX)又称原豚素(Spheroidine)、东方豚毒素(Fugupoison)等,是一种剧毒的生物碱类天然神经毒素,最初是从豚科鱼的卵巢和肝脏中提取得到的。TTX对钠通道具有阻断作用,它能够与肌肉、神经细胞膜上钠离子通道受体结合,抑制动作电位的传导。TTX除用作神经生理学、肌肉生理学的工具药外,还具有相当强的镇痛作用,并极有可能成为新的局部麻醉药和戒除药物依赖性的药物,而且具有不成瘾的特点,这就使TTX的具有广泛的应用前景。目前市场上的TTX主要从河豚鱼的卵巢和肝脏组织获得,如果能通过微生物发酵生产TTX,由于微生物生长迅速等特点,不仅可以满足市场的需求,而且对于保护河豚鱼免受因河豚毒素的开发而濒危灭绝有重要意义。   TTX的起源目前一直存在争议,TTX最早在河豚体内被发现,并且人们已经注意到它有显著的个体、器官和组织差异性,在肝脏和卵巢中的含量最高,而人工养殖的河豚基本无毒。TTX不仅存在于河豚体内,在其他多种生物也发现了TTX或TTX类似物。这些含有TTX的生物有一个共同点,即其体内含有多种能分泌TTX及其类似物的细菌。近年来,已发现了多种能产生TTX的微生物,因此主张微生物起源假说的学者越来越多。   本文以采集于我国福建海域的横纹东方鲀为研究对象,对其不同组织器官中的微生物进行了分离纯化,并对肠道内细菌进行了种属鉴定,对其发酵产物进行了处理,采用小鼠生物检测与柱后衍生高效液相色谱检测相结合的方法,检测发酵产物中是否含有TTX。结果表明:横纹东方鲀肠道内存在3株可以产生TTX的细菌,通过16S rDNA序列分析表明,HDC13为凝聚短状杆菌,HDC35为巨大芽孢杆菌),HDC37为速生嗜冷杆菌;通过混合培养后检测发现(HDC13+HDC35+HDC37)和(HDC35+HDC37)有较好的致死效果。   总之,本文首次分离并鉴定了横纹东方鲀肠道内细菌,并对肠道内细菌产TTX的能力进行了研究,发现三株可以产TTX的细菌。为TTX的微生物起源奠定了基础,同时也为下一步TTX生物合成途径的研究提供了菌种资源。   第二部分胜利油田原油组分的分析及石油降解菌的筛选   原油是存在于地下岩石孔隙中的以液态烃为主体的可燃有机矿产,原油又称石油。原油是一种极为复杂的混合物,其主要组成是烃类。包括链烷烃、烯烃、环烷烃和芳香烃,还含有微量的硫、氮化合物。不同油田生产的原油,因组成不同,往往具有不同的性质。不同性质的原油,要采用不同的加工方法,以生产适当的产品,使原油得到合理利用。因此原油组分的分析对原油的加工处理具有重要意义。随着海上溢油的频繁发生,溢油的鉴别变的尤为重要,而油指纹又是溢油鉴别的主要手段。此外,文献中已经报道多种石油降解菌,微生物降解石油具有操作简单,费用低和无二次污染等优点。因此,高效石油降解菌筛选就成为微生物降解石油的关键。   本文首先采用气相色谱-质谱(GC-MS)的方法对胜利油田原油组分进行了定性分析,同时利用CPI(碳优势指数)、Cmax(主碳峰)、(?)、(?)C28+C29、 C2+、(?)等值数进行了原油指纹信息的分析。通过组分定性分析,共定性了原油中的103种化合物,其中饱和链烷烃的质量分数为89.864%;通过指纹信息分析,确定了胜利油田原油的成熟度高(CPI=1.0267),母质类型好((?)>1.2):原油沉积环境属于海相还原沉积环境((?)<1)。其次,本文从石油污染的土壤中分离得到三株高效石油降解菌,经16srDNA测序鉴定有两株属于不动杆菌属,一株属于芽孢杆菌属;三株菌均具有高效降解石油的能力,能够降解大部分石油烃。
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