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东海区沿海居民有食用河鲀习惯,因此河鲀毒素中毒事件频繁发生。针对河鲀毒素外源性累积学说,进行东海区黄鳍东方鲀肠道微生物研究和食物组成分析。本论文实验包括三个部分,第一部分利用细菌16SrRNA(515F-907R)和真菌ITS(ITS1F-ITS2R)引物扩增2018年每个月份混合采集5尾黄鳍东方鲀肠道微生物物种序列,根据黄鳍东方鲀季节性毒性差异分析每个月份含河鲀毒素物种,研究TTX含量季节性变化与肠道微生物产TTX微生物物种含量关系。第二部分利用鱼类线粒体DNA条形码和黄鳍东方鲀肠道内含物形态学鉴定进行物种鉴定,根据每月内含物物种组成分析其毒性情况,验证黄鳍东方鲀河鲀毒素来源与食物链假说。第三部分基于黄鳍东方鲀肠道衍生的研究东海区黄鳍东方鲀寄生派氏异尖线虫Anisakis pegreffii感染情况和毒性鉴定。主要结果如下:1.东海区野生黄鳍东方鲀周年样本肠道微生物多样性物种检测根据河鲀毒素细菌起源学说,黄鳍东方鲀肠道细菌组成中,已有文献报道多种产河鲀毒素细菌:溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、芽孢杆菌(Bacillus spp)、放线菌(Actinomvcete spp)、假单胞菌(Pseudomonas species)、腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)、黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、曼利斯顿氏菌(Listonella spp)和不动杆菌(Acinetobacter spp)。本文以东海区野生黄鳍东方鲀的肠道内含物作为检测样品,高通量测序分析其肠道原核和真核微生物构成。结果表明,优势菌为:α变形菌(Sphingobium)、乳球菌(Latococcus)、弧菌属(Vibrio)、弓形杆菌属(Arcobacter)、芽孢杆菌(Bacillus)、发光杆菌属(Photobacterium)、文肯菌属(Rikenella)、嗜冷杆菌属(Psychrobacter)和肠球菌(Enterrococcus)。分析野生黄鳍东方鲀周年组织毒性与各个月份黄鳍东方鲀肠道菌群分布特点的相关性。2.东海区野生黄鳍东方鲀食物组成分析黄鳍东方鲀摄食周年性调查,简单来说,主要是研究鱼类吃什么、怎样吃、吃多少和吃下的食物用于机体各种生命活动的分配方式,以及季节性环境因子与黄鳍东方鲀毒性相关性研究。研究目的是确定黄鳍东方鲀体内河鲀毒素季节性累积情况与所食饵料生物毒性累积情况的相关性,为合理利用东海海域饵料资源、提高黄鳍东方鲀养殖效果和侦察东海区黄鳍东方鲀索饵鱼群提供具体生态学依据。2018年1月-2018年12月在上海东海区收集了283尾黄鳍东方鲀有效内含物样本,采用内含物定量分析法和分子DNA条形码鉴定法对黄鳍东方鲀周年性食物定性和定量研究。结果发现:(1)黄鳍东方鲀全年均具有摄食活动,春季饱满指数强度最高、秋季最低,春季空胃率最高、冬季最低。(2)黄鳍东方鲀食性由70多种饵料生物组成,包括鱼类、虾类和蟹类。黄鳍东方鲀食性相对重要性指数表明,主要食物为:黄鳍东方鲀(Takifugu xanthopterus)相对重要性指数IRI(36%)自相残食情况较多,在夏季出现较多。鳀鱼(Engraulis japonicus)相对重要性指数IRI(34%)、日本带鱼(Trichiurus japonicus)相对重要性指数IRI(12%)、派氏异尖线虫(Anisakis pegreffii)相对重要性指数IRI(5%)、太平洋磷虾(Euphausia pacifica)相对重要性指数IRI(3%)和双喙耳乌贼(Sepiola birostrata)。(3)综合结果表明,黄鳍东方鲀夏季河鲀毒素含量明显高于其他季节,与夏季所食饵料物种毒性有相关性。3.东海区黄鳍东方鲀体内寄生线虫感染情况及线虫河鲀毒素分布野生黄鳍东方鲀组织内派氏异尖线虫感染情况,调查2018年所解剖的黄鳍东方鲀,发现11月份黄鳍东方鲀体内被异尖线虫感染情况最高,单尾黄鳍东方鲀体内寄生了135条异尖线虫。东海野生黄鳍东方鲀,感染率最高11月中被解剖的黄鳍东方鲀感染率可达到20%。由于黄鳍东方鲀是中小型肉食性鱼类,在摄食过程中,藻类、箭虫、扁虫、乌贼、鳀鱼和龙头鱼等多种鱼类异尖线虫的传播媒介。根据质谱检测结果,得出河鲀毒素标准品曲线,计算出异尖线虫的河鲀毒素含量是0.425μg/g。根据TTX标准品出峰时间,在302离子峰和161离子碎片出峰图确定河鲀毒素。本次调查主要针对东海芦潮港沿岸野生黄鳍东方鲀,可以反应出派氏异尖线虫对河鲀毒素的耐受作用。对黄鳍东方鲀感染组织原位拍照发现,感染率最高的组织是肝脏,高达14%,黄鳍东方鲀肝脏的感染强度为2条/尾。解剖发现黄鳍东方鲀心脏、肾脏、鱼鳃和胃部等异尖线虫感染率则为零,这与异尖线虫的幼虫随食物链途径传播和累积至黄鳍东方鲀体内的结果是一致的。总体表明,黄鳍东方鲀毒性的季节性变化与肠道微生物季节性差异和饵料物种组成有相关性。