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本研究试图从分子生物学角度来揭示目前猪瘟仍频繁发生的原因，为广泛开展CSFV分子流行病学的研究提供基础资料，为CSF的防制提供科学依据和理论支持，为猪瘟诊断提供稳定的标准诊断抗原及诊断方法。本论文由4部分构成：1.应用RT-PCR和nPCR扩增了7株国内近期流行的CSF野毒E2基因，分别克隆于pGEM-T Easy载体，对其进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列推导，同时将其与C株，Alfort株，Brescia株进行了同源性比较及遗传进化分析，并构建了CSFV的遗传发生树。结果表明，7株流行野毒与C株，Alfort株，Brescia株核苷酸序列同源性分别为91.6%～94.5%，89.2%～92.7%和85.9%～89.3%，氨基酸同源性分别为91.2%～95.8%，88.9%～92.0%和84.0%～90.1%；而7株野毒之间的差异很小，其核苷酸序列同源性为95.8%～99.7%，氨基酸同源性为96.3%～99.1%。所绘制的遗传发生树分为2个组群，所测得7株流行野毒均属于第1群，而且可分为两亚群，与C株和HCLV株都在同一亚群。表明现行猪瘟病毒流行株的变异呈现一定的多样性，并不尽向远离疫苗株的方向变异，现行的猪瘟疫苗在一定程度上仍然可以起到保护作用。2.应用RT-PCR技术对中国猪瘟兔化弱毒株，经典强毒株石门毒株(Shimen)，近期地方流行的属于第一群毒株的新疆毒株(XJ)和第二群代表毒株甘肃临洮(LT)株E2基因的主要抗原区(包括A，B，C，D在内)进行扩增，均得到约561bp的基因片段。将这4个基因分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中，经酶切、PCR扩增和测序分析确证其正确插入到表达载体中，且阅读框正确，从而构建成重组表达载体。重组质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中，用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达，用SDS-PAGE电泳，Western-blotting和薄层凝胶扫描分析表达的蛋白。结果表明，E2基因的主要抗原区可以在大肠杆菌中表达，表达的蛋白多以包涵体形式存在，表达产物的分子量约为50kDa(目的基因的蛋白分子质量为21.7kDa，载体GST分子质量为29kDa)，与理论推测的蛋白分子量一致；薄层凝胶扫描分析表明，表达蛋白约占菌体蛋白总量的20%～30%；经Western-blotting证明，表达的E2蛋白可被猪瘟阳性血清所识别，表达蛋白可用于基因工程诊断抗原。3.C株和LT株E2基因主要抗原区在pGEX-4T-1表达载体中表达产量较高，但是都以包涵体形式存在，必须经过复性才具有生物学活性。收集诱导表达的菌液，超声波破碎分离包涵体，尿素和Triton X-100分别洗涤包涵体，用尿素溶解包涵体，复性液稀释变性蛋白，缓冲液透析获取纯化蛋白。SDS-PAGE分析电泳结果表明，尿素和Triton X-100可洗去部分杂蛋白，8mol/L尿素能很好的溶解包涵体，回收率较低约10%，其纯度可达70%。ELISA试验测定的结果显示，与复性前变性蛋白相比，纯化蛋白与CSFV阳性血<WP=6>清反应的特异性提高20倍左右。可以批量生产基因工程诊断抗原来取代全病毒抗原；有望进一步研制针对E2的单克隆抗体，为CSF的诊断提供先进的技术。 4.用纯化的猪瘟病毒重组E2蛋白作为抗原包被酶标板，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗猪IgG为二抗，建立了检测猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法，并确定了ELISA最佳工作条件：C株和LT株抗原包被浓度分别为8.7μg/mL和11.7μg/mL，37℃放置1h后，再4℃过夜，猪瘟阳性血清(1∶160)在37℃作用1h，二抗(1∶800)37℃作用1h，底物溶液37℃显色15min。通过重复性试验，交叉试验，特异性试验和稳定性试验等试验结果表明该方法重复性好，特异性强，灵敏度高；与用猪瘟全病毒为抗原的ELISA试剂盒，间接血凝试剂盒比较，特异性为97.14%，敏感性为93.18%，两者的符合率为95%，经统计学分析，这两种检测方法的检验结果无显著性差异(P>0.05)。用已建立的方法检测临床血清样本148份，总阳性率为68.91%。本研究结果为猪瘟诊断方法的标准化提供了实验基础，为猪瘟的诊断与监测提供一种良好的技术手段。