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目的:MicroRNA(miRNA)是一类新发现的能够调控其靶基因表达水平的小RNA分子家族。近几年已经发现并确定了上千种miRNA,目前miRNA的功能研究正日益成为生物学一个非常活跃的研究领域。本研究旨在结合生物信息学、基因芯片及报告基因技术预测和确定miR-214在人类肿瘤细胞中的靶基因,并对miR-214通过调控靶基因而在肿瘤细胞中发挥的生物学功能进行进一步研究。方法:利用miRNA芯片技术对几种不同组织来源肿瘤细胞系中miR-214的表达水平进行比较,随后在使用miR-214反义寡聚核苷酸特异性抑制细胞内miR-214功能后,利用MTT法和软琼脂克隆形成实验筛选分析miR-214对肿瘤细胞活性和增殖能力的影响。在此基础上结合靶基因预测程序和mRNA表达谱芯片以及半定量RT-PCR的结果对miR-214的靶基因进行预测和筛选,并通过检测GFP报告基因的方法进行验证。随后根据已知的该靶基因功能,应用肿瘤细胞运动能力实验和测定生长曲线的方法确定miR-214对肿瘤细胞运动能力和增殖能力的调控作用。结果:通过对miRNA芯片结果的分析发现在人类肿瘤细胞系HT-29,HeLa,MCF-7,A549,K562,ES-2中miR-214的表达都保持在较一致的水平。随后利用MTT法和软琼脂克隆形成实验对miR-214的功能进行筛选分析,发现在HeLa细胞中miR-214功能受到抑制后肿瘤细胞的活性和增殖能力均明显增强。在此基础上利用长寡聚核苷酸基因芯片(共7267个人类基因,包含凋亡相关基因、肿瘤相关基因、信号转导相关基因、肝酶代谢相关基因、细胞因子相关基因)分析抑制miR-214的功能后mRNA表达谱的变化,选取部分表达有差异基因经过半定量RT-PCR验证,最终得到与芯片结果相符的基因有四个:Plexin-B1,MDH1,COX5A和RAC1。其中Plexin-B1是靶基因预测程序分析后认定的miR-214可能靶位点,在miR-214的功能被抑制后表达升高,我们通过检测GFP报告基因的方法确定了miR-214可以通过与Plexin-B1 3’UTR预测靶位点区域的直接相互作用抑制报告基因GFP的表达。随后,根据已知的该靶基因功能,一方面通过测定生长曲线确定了miR-214对肿瘤细胞增殖能力的抑制作用,另一方面利用肿瘤细胞趋化性运动能力实验,证明了miR-214可以通过靶定Plexin-B1而抑制肿瘤细胞的运动能力。结论:本文预测并首次确定了Plexin-B1是miR-214在人类肿瘤细胞内的直接靶基因,miR-214可以介导Plexin-B1 mRNA的降解。通过实验首次证实了miR-214可以通过调控靶基因Plexin-B1的表达而抑制肿瘤细胞的运动和增殖能力。对miR-214调控功能及其相关调控机制的研究有助于我们深化对于肿瘤细胞的生长,运动能力等生物学特性及其调控机制的理解,同时也为肿瘤的治疗提供一条可能的新途径。