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胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells，ES)是一种全能干细胞，能在体外进行培养、传代，并在一定条件下保持未分化的二倍体状态及其全能性，具有形成嵌合体、显示生命活动的能力。单细胞克隆系由于其来源于同一个祖先细胞，所以同源性强，无遗传差异，生物学性状均一，细胞系稳定。可为禽类胚胎干细胞的遗传操作提供遗传背景相同的细胞系。本研究利用鸡第X期的胚胎干细胞，采用口吸管法、细胞稀释法和克隆环法三种不同的方法，将细胞集落分离成单个细胞，并接种至96孔板，每孔内接种1个细胞，采用细胞化学法和免疫荧光法检测细胞表面标志物。进行单细胞克隆制备方法的比较，结果显示，口吸管法克隆形成率为0，克隆环法克隆形成率为1％，细胞稀释法克隆形成率为4.2％。经碱性磷酸酶(AKP)活性和阶段特异性表面抗原-1(Stage specific embryonic antigen-1，SSEA-1)免疫荧光鉴定均呈阳性，扩增出的克隆能稳定增殖不分化。结果表明，细胞稀释法操作简单易行，实验时间短，对细胞伤害小，为鸡ES单细胞克隆进一步建系提供切实可行的方法。
“睡美人”转座子(Sleeping Beauty，SB,transposon)是TCl/mariner转座因子超家族中的一员，是目前在脊椎动物中转座活性最高的转座子。本文以pEGFP-N1和PT2/BH载体质粒为材料，将报告基因EGFP插入到PT2/BH载体质粒中构建重组载体PT-EGFP。PT-EGFP经 PCR、酶切鉴定验证构建正确后，提取并纯化重组质粒。转染COS-I细胞，荧光显微镜下观察GFP的表达。采用PT-EGFP与“睡美人”转座子系统转染鸡精原干细胞，探讨不同浓度转座子促进外源基因整合效率，将SB与PT-EGFP之比分为0:1、1:3、1:5、1:10、1:15、1:20、1:25六个梯度，通过电穿孔法染转染鸡精原干细胞。试验结果显示转染原代SB与PT-EGFP的比为1:5、1:10、1:15的荧光表达率最高，分别为23.23％、24.25％、2251％；传一代后SB与PT-EGFP的比为1:5、1:10荧光表达率最高，分别为4.67％、4.66％；传二代后SB与PT-EGFP的比为1:5、1:10、1:15的荧光表达率，分别为0.94％、1.08％、0.94％。以上结果表明SB具有促进载体质粒表达及基因整合的作用，其中SB-与PT-EGFP的比为1:5、l:10、1:15的效率最高。提取转染后第二代细胞DNA，PCR检测结果为阳性。进一步将“睡美人”转座子应用于转基因鸡奠定了坚定的基础。