论文部分内容阅读
目的 探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSC)移植联合组织工程材料透明质酸(Hyaluronic acid,HA)对瘢痕性声带固有层的组织再生的作用。 方法 获取培养鉴定得到大鼠的BM-MSC 后运用绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)标记大鼠的BM-MSC。在体外实验中,通过流式细胞仪检测GFP标记的BM-MSC细胞的增殖和表达来评估大鼠BM-MSC嵌入透明质酸(Hyaluronic acid,HA)的兼容性和稳定性。体内实验中,将16只大鼠随机分为4组,根据右侧声带损伤1月后注射治疗采用不同的注射物命名为生理盐水组(S组)、BM-MSC(M组)、HA(E组)、BM-MSC植入HA (M+E组)。所有的大鼠右侧声带损伤1个月后,分别注射生理盐水(S组)、BM-MSC(M组)、HA(E组)、BM-MSC植入HA(M+E组),通过注射方法治疗瘢痕形成的声带。在治疗后的1 个月,检测Ⅲ型前胶原肽(procollagen-III)、纤连蛋白(Fibronectin,FN)、透明质酸合酶-III(Hyaluronic acid synthase 3,HAS3)、透明质酸酶(Hyaluronidase 3,HYAL-3)、平滑肌肌动蛋白(Smoothelin,SMA)以及转化生子因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)的mRNA的表达水平,做免疫组化评价治疗效果;GFP标记的存活的BM-MSC的通过免疫荧光来评估;将各组大鼠喉标本切片使用苏木素和伊红(Hematoxylin and Eosin,H&E)染色后于10倍镜下分析大鼠声带固有层厚度,以正常大鼠的固有层作为对照,固有层厚度的取值:最厚部位厚度、最薄部位厚度以及中间部位厚度这3个数值的中值。 结果 BM-MSC植入HA在体外生长表达Sca-1、透明质酸受体CD44阳性,并能继续增殖。在体内研究中,GFP标记的BM-MSC注射治疗瘢痕声带1月后仍能检测到存活的BM-MSC。植入在HA的BM-MSC组III型前胶原、纤连蛋白,TGF-β1水平升高。植入在HA的BM-MSC,相比单独注射BM-MSC组,SMA表达下调,而HYAL3表达上调;同生理盐水组比较,HAS3相比没有变化,大鼠的SMA表达下调,而 HYAL3 表达上调。BM-MSC 组、BM-MSC 联合HA治疗组和HA治疗组的固有层厚度明显小于对照组,和正常组接近。 结论 将BM-MSC和HA联合注射到大鼠受损的声带中,可促进声带固有层细胞外基质(extracellular matrix ,ECM)的沉积和生长因子的产生,而不影响成肌纤维细胞的分化,促进瘢痕声带的修复。