【摘 要】
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目的: 建立全人源单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)库的噬菌体展示技术. 方法: 收集100名未免疫健康老年志愿者每人5mL血液,全部混匀后分离B淋巴细胞
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目的: 建立全人源单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)库的噬菌体展示技术. 方法: 收集100名未免疫健康老年志愿者每人5mL血液,全部混匀后分离B淋巴细胞,经RNA抽提、cDNA合成后以其为模板,以IgG类抗体基因为引物,PCR获得重链可变区片段(VH)和轻链可变区片段(VL),然后以VH和VL为模板,经过重叠PCR获得scFv.通过sfiI酶切位点将scFv插入pComb3xss载体中,电转后得到一定容量的抗体库.加入辅助噬菌体VCSM13过夜培养,上清经PEG 8000/NaCl沉淀,重悬噬菌体沉淀,即完成了噬菌体抗体库的构建. 结果: 成功构建了库容为2.6×109的噬菌体抗体库,并通过筛选抗流感病H1N1 HA蛋白的抗体获得验证. 结论: 我们成功建立了一种改进的构建噬菌体抗体库的技术平台,可用于各类功能抗体的筛选.
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