【摘 要】
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1.家蚕淀粉酶基因的克隆、序列分析及表达特征 淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的通称，是家蚕体内比较重要的一种消化酶。根据在家蚕转录组数据库中预测的编码家蚕淀粉酶的cDNA
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1.家蚕淀粉酶基因的克隆、序列分析及表达特征 淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的通称，是家蚕体内比较重要的一种消化酶。根据在家蚕转录组数据库中预测的编码家蚕淀粉酶的cDNA序列设计引物，利用 RT-PCR技术克隆到两个家蚕淀粉酶基因Bmamy7和 Bmamy5，Bmamy7全长为1608bp，ORF为1512bp，编码503个氨基酸，具有完整的淀粉酶结构域；Bmamy5具有三个转录本，我们克隆到转录本1，全长1196bp，ORF为738bp，编码245个氨基酸，但是不具有完整的淀粉酶结构域。构建了重组质粒，转化大肠杆菌感受态BL21，IPTG诱导表达，经SDS-PAGE电泳检测，Bmamy7重组蛋白以包涵体的形式存在，没有检测到酶学活性；未检测Bmamy5重组蛋白的目的条带。利用Real time PCR技术对Bmamy7和Bmamy5基因在家蚕5龄3天不同组织的mRNA表达水平进行分析，结果显示Bmamy7在家蚕5龄3天中肠和马氏管组织中均有表达，在中肠组织的表达量较高达3千万个拷贝/10ngRNA，在马氏管组织中的表达量较低，只有19万个拷贝/10ngRNA；Bmamy5只在中肠组织中有表达，表达量为1500万个拷贝/10ngRNA。 2.猫干扰素ω2和ω9表达及活性检测 将优化合成的猫ω型干扰素基因FeIFNω2和FeIFNω9克隆到杆状病毒转移载体pVL1393的多角体蛋白基因启动子下游，与家蚕亲本病毒Bm-Bacmid DNA共同转染家蚕BmN细胞进行同源重组，用获得的重组病毒感染家蚕5龄幼虫，利用家蚕生物反应器表达猫ω型干扰素。采用微量细胞病变抑制法在CRFK细胞/VSV*GFP系统上检测家蚕幼虫血淋巴中的猫重组ω型干扰素具有抗病毒活性，FeIFN-ω2的表达产物抗VSV病毒的活性至少可达6.3±1.5×105U/mL，而FeIFN-ω9的表达产物仅有较低的抗VSV病毒活性。研究结果为利用家蚕杆状表达系统生产和开发猫重组ω型干扰素生物制剂奠定了一定的试验基础。
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