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目的:(1)证明蔡氏扶正消癥汤有抑制人胃癌细胞增殖的作用
(2)证明蔡氏扶正消癥汤有抑制人胃癌细胞血管生成的作用
方法:(1)采用MTT法检测扶正消癥汤对人胃癌细胞SGC-7901、大鼠内皮细胞增殖的影响
(2)琼脂糖刮除法检测扶正消癥汤对大鼠内皮细胞迁移的影响
(3)用免疫组化S-P法检测扶正消癥汤对肿瘤血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响
结果:(1)2.2mg/ml蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞增殖的影响与空白对照比较没有显著性差异(P>0.05),4.4、6.6、8.8、9.9、11mg/ml蔡氏扶正消癥汤对SGC-7901的增殖抑制率分别为24%、42%、66%、78%和86%,提示从4.4~11mg/m实验浓度范围内,其增殖抑制率与药物浓度呈正相关(P<0.05)。同一剂量的蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞作用时间越长,其抑制细胞增殖的效果越明显。同一时段,药物剂量越大,抑制作用越明显(P<0.05)。
(2)1.1mg/ml蔡氏扶正消癥汤对肿瘤细胞条件培养液作用下和牛血清作用下的内皮细胞的增殖的影响与空白对照相比没有显著性差异(P>0.05),2.2mg/ml蔡氏扶正消癞汤生药即能明显抑制内皮细胞的增殖(P<0.05),增殖抑制率为12%和27%,4.4、5.5、6.6mg/ml增殖抑制率为46%、57%、72%和49%、62%、79%,从2.2~6.6mg/ml实验浓度范围内,随着药物浓度的增加,其增殖抑制作用更加明显。而通过时效关系实验看,同一剂量的蔡氏扶正消癥汤药物对内皮细胞作用时间越长,其抑制细胞增殖的效果越明显。同一时段,药物剂量越大,抑制效果越明显(P<0.05)。
(3)4.4mg/ml的蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞抑制率只有24%,而对内皮细胞抑制率可高达49%和46%。由此可见蔡氏扶正消癥汤对内皮细胞具有选择性抑制作用,是一种特异性内皮细胞生长抑制剂。
(4)条件培养液能明显促进内皮细胞迁移,使迁移的细胞数明显增加(p<0.05)。10%FBS组和条件培养液组,在2.2mg/ml蔡氏扶正消癥汤处理48h后,内皮细胞的迁移数量较对照组明显减少,差异有显著性(p<0.01),并且迁移细胞数随着蔡氏扶正消癥汤浓度的增加而减少(p<0.01)。
(5)蔡氏扶正消癥汤在较低的剂量(2.2mg/ml)即可显著抑制内皮细胞迁移,抑制率为45%和42%,而在相同剂量下对内皮细胞的增殖抑制率只有28%和12%,提示蔡氏扶正消癥汤抗迁移能力明显大于抗增殖能力(p<0.01)。
(6)蔡氏扶正消癥汤浓度为1.1mg/ml时其平均吸光度分别为(0.096±0.004),与空白对照组平均吸光度(0.125±0.025)有显著差异(P<0.01),并且VEGF平均吸光度随蔡氏扶正消癥汤浓度增加而降低,说明蔡氏扶正消癥汤能抑制VEGF的表达。
结论:1、蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞增殖的抑制作用存在明显的时间-剂量依赖关系
2、蔡氏扶正消癞汤对内皮细胞增殖的抑制作用存在明显的时间-剂量依赖关系
3、蔡氏扶正消癥汤对内皮细胞的抑制效果大于胃癌细胞,提示蔡氏扶正消癥汤可能是一种特异性内皮细胞生长抑制剂
4、蔡氏扶正消癥汤对内皮细胞迁移的抑制作用与剂量呈明显的正相关
5、蔡氏扶正消癥汤抗迁移能力明显大于抗增殖能力,可能是通过抑制内皮细胞迁移,从而抑制新生血管生成
6、蔡氏扶正消癥汤能抑制VEGF的表达,提示蔡氏扶正消癥汤有抗血管生成作用