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实验目的：
脂肪干细胞是一种来源于脂肪组织的，具有多向分化潜能的间充质干细胞。该细胞具有来源丰富、易于获取、免疫排斥反应低等优点。这为脂肪干细胞成为骨组织工程中理想的种子细胞创造了条件，但在临床应用时还应充分考虑供体年龄因素对成骨分化能力的影响，年龄因素对成骨能力的影响直接关系到移植后愈合的效果。由于碱性磷酸酶与成骨机制有着密切的相关性，所以本研究探讨年龄因素在体外实验中对人体脂肪干细胞成骨诱导过程中碱性磷酸酶活性的影响，旨为脂肪干细胞的基础研究及临床应用提供依据。
实验方法:
24例样本来自年龄26～45岁的女性志愿者。所选样本均排除内分泌疾病、自身免疫病、近期服用激素者及其它传染性疾病等。样本源自中国医科大学附属一院整形外科及另三家整形美容机构，于2011年5月至2012年10月间行腹部皮下脂肪抽吸术的患者。将24例患者按年龄分组，其中A组:26～29岁5例，年龄（27.0±1.0岁）;B组:30～39岁12例，年龄（34.3±3.0岁）;C组:40～45岁7例（42.3±1.8岁）。三组患者身高及体重无显著性差异，志愿者均取得知情同意。对经脂肪抽吸术获得的脂肪组织应用胶原酶消化法分离提取脂肪干细胞，对细胞进行原代及传代培养并行成骨诱导。培养一定时间后行茜素红染色及碱性磷酸酶染色。将传代培养的第三代细胞以1×104/孔密度接种到96孔板，其中5孔加入普通培养液基，并以此为对照组，5孔加入成骨诱导培养基，分别于第1、2、3、4周应用碱性磷酸酶测试盒进行操作并应用酶标仪以520nm波长下测定其样本OD值，并根据样本OD值计算出样本碱性磷酸酶活性值。采用SPSS17.0统计软件进行统计分析，多组间均数比较采用单因素方差分析，SNK检验，两两组间的参数比较采用Dunnett-t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。
实验结果：
一、脂肪干细胞的体外培养
从脂肪组织中分离的细胞贴壁后呈小多角形或梭型，经培养一定时间后镜下可见细胞数量有明显的生长，细胞间变的密集，同时细胞形态也发生了改变，呈现统一的梭型的形态，并按旋涡状或平行排列生长。
二、脂肪干细胞的成骨分化
经成骨诱导后的脂肪干细胞进行碱性磷酸酶染色可见咖啡色的颗粒充满胞浆。进行茜素红染色可见桔红色沉积的矿化结节（即钙结节）散在分布。
三、碱性磷酸酶活性值的测定
各年龄段实验组与对照组比较均有显著性差异(P＜0.01);除26～29岁年龄组与30～39岁年龄组之间比较，在成骨诱导第1，2周时无显著性差异(P＞0.05)外，其它在各时段内26～29岁年龄组，30～39岁年龄组，40～45岁年龄组组间比较，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。
实验结论：
1、脂肪干细胞具有稳定的增殖传代及分化成骨的能力。
2、年龄因素可以影响脂肪干细胞成骨诱导过程中碱性磷酸酶的活性，随着年龄的增加碱性磷酸酶活性逐渐降低。