【摘 要】
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本论文利用淀粉酶水解圈做筛选模型,从农大附近稻田采集土壤,筛选得到产高温淀粉酶能力较强的细菌E10,鉴定为芽孢杆菌。为提高菌株产酶能力,进行了碳源、氮源种类及质量分数,
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本论文利用淀粉酶水解圈做筛选模型,从农大附近稻田采集土壤,筛选得到产高温淀粉酶能力较强的细菌E10,鉴定为芽孢杆菌。为提高菌株产酶能力,进行了碳源、氮源种类及质量分数,无机盐种类及质量分数,种龄及接种量、pH值,温度、发酵时间的单因素试验。通过选取影响酶产生的发酵培养基主要因素(麸皮用量、硝酸钾、氯化钙质量分数,p田及发酵条件主要因素(种龄、接种量、温度、时间),对发酵用的培养基配方及发酵的最佳条件进行了L9(34)正交优化试验。采用盐析、透析、柱层析等方法对高温淀粉酶进行了分离纯化。通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了该酶分子量,并进行了酶学性质的研究。结果表明：选育的菌株E10在试验条件范围内,种龄24 h,接种量7%,最适产酶发酵培养基为2.0%的麸皮,0.1%的硝酸钾,0.25%的氯化钙,初始pH值为6.0,最适产酶条件是接种菌龄为24 h,接种量为7%,发酵温度36℃,发酵时间48 h。在此最优条件下,菌株产α-淀粉酶的酶活力可达到180.94 U/mL。柱层析之后的淀粉酶达到电泳纯,其最适温度为70℃,最适pH为7.0。酶稳定性试验结果表明,该酶在70℃以下,pH 6.0-7.0之间有较好的稳定性。K+离子对酶活有促进作用,Mn2+、Cu2+、Fe2+、Ca2+、Mg2+对酶活有抑制作用。
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