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褪黑素作为自由基的清除剂可以通过清除卵母细胞内的活性氧从而来消除氧化应激对卵母细胞造成的不良影响,此外卵丘细胞与卵母细胞成熟联系紧密,且卵丘细胞在卵母细胞成熟和受精过程中的作用比较重要,本文主要研究了褪黑素及卵丘细胞对卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响。从而进一步优化卵母细胞体外成熟的培养体系。试验一主要为对照组、褪黑素组、褪黑素受体抑制剂组和褪黑素+褪黑素受体抑制剂组四组,主要检测了胚胎发育指标、活性氧含量、线粒体分布、谷胱甘肽含量及相关基因表达情况。结果发现,成熟液中添加褪黑素后其卵丘扩展指数、极体排出率、胚胎卵裂率、囊胚率要显著高于其他三组(P<0.05)。褪黑素组谷胱甘肽含量与褪黑素+抑制剂组差异不显著,但是显著高于对照组和抑制剂组(P<0.05)。褪黑素组中线粒体均匀分布的卵母细胞比例显著高于对照组(P<0.05),且卵母细胞内活性氧水平显著低于对照组(P<0.05)。褪黑素组对卵母细胞成熟相关GDF9基因表达没有显著影响(P>0.05),但是显著降低了促凋亡基因P53和BAX的表达(P<0.05),并且提高抗氧化基因CAT和成熟相关基因BMP15的表达。结果表明:褪黑素作用于其受体来提高猪卵母细胞体外成熟发育效果并影响卵母细胞卵丘扩展情况,可促进猪卵母细胞内谷胱甘肽酶的生成和线粒体空间分布,并降低胞内活性氧含量;添加褪黑素显著降低促凋亡基因P53和BAX的表达,并提高抗氧化基因CAT和成熟相关基因BMP15的表达。试验二主要为裸卵组、共培养组和卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)组,主要检测了胚胎发育相关指标及相关基因表达情况。结果发现,COCs组存活率显著高于裸卵组(P<0.05),COCs组和共培养组两组间的存活率差异不显著(P>0.05);COCs组第一极体率显著高于共培养组和裸卵组(P<0.05),COCs组卵裂率和囊胚率要显著高于共培养组跟裸卵组(P<0.05)。裸卵组显著下调了Gpx3、Gpx4、Gclm、Gsto1、Gclc的表达(P<0.05),但是谷胱甘肽巯基转移酶基Gstz1的表达与COCs组相比差异不显著(P>0.05)。本试验结果表明:将裸卵与卵丘细胞共培养,会显著增加裸卵的成熟率及其后期胚胎发育能力,但是其成熟效果及发育能力仍低于卵丘-卵母细胞复合体。卵丘细胞能促进卵母细胞谷胱甘肽合成代谢相关基因Gclc、Gclm、Gpx3、Gpx4、Gtso1的表达。