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目的: 双黄连中药注射剂所致的不良反应目前主要归结为过敏反应，常采用肾上腺素等来进行救治。本课题组前期研究表明，双黄连中药注射剂可致缓慢性心律失常，而肾上腺素具有正性频率及正性肌力作用。鉴于此，本研究将通过动物实验来探索肾上腺素对抗救治双黄连注射剂所引起的缓慢性心律失常的机制。 方法: 1.豚鼠在体心电图记录: 先给豚鼠以浓度为20％的乌拉坦（由乌来糖配制而成）腹腔注射麻醉，仰面朝上放置，以绳固定四肢，再于一侧分离出颈静脉，以静脉输液针插管，给药。分别向前后肢皮下扎进无菌针灸针以引导Ⅱ导联心电信号，多道生理信号采集处理器采集电信号并存进计算机。通过静脉注射药物约5分钟开始记录心电图，并通过分析心电图的心率，P-R间期，QRS间期和QTc间期参数。 在体实验药物剂量的转化:按照体表面积系数计算，且按照每公斤体重进行比较，国际标准豚鼠用剂量为人用剂量的4.6倍。双黄连（冻干）在临床上的使用剂量为60 mg·kg-1，则转化到豚鼠的剂量是276 mg·kg-1（1倍临床等效剂量）;肾上腺素（盐酸盐）成人使用的临床极量是1mg(皮下注射)，同上可得0.078 mg·kg-1（1倍临床等效剂量），0.0078 mg·kg-1（1/10临床等效剂量）和0.039 mg·kg-1（1/2倍临床等效剂量）。 2.豚鼠离体心电图记录: 选取Langendoff装置逆向灌流离体心脏，待心脏复跳，用3根银丝电极引导记录Ⅱ导联心电信号:银丝电极的正极放置在心尖处，负极放置在右心房处，主动脉根部连接接地电极。心电图的电信号待离体心脏跳动稳定后，由多道生理信号采集处理器采集并存进计算机。心电图的记录由静脉给药前和给药后约5min后开始，并分析由心电图得到的心率(HR)、P-R间期、QRS间期和QTc间期等参数。 根据说明书所规定的，双黄连(SHL)注射液成人临床用量为60 mg·kg-1，转化为临床0.3 g·L-1，因此实验用离体1倍SHL浓度为0.3 g·L-1。根据说明书规定，肾上腺素（盐酸盐）极量为1mg，则1倍为0.083 mg·L-1，5倍临床肾上腺素（盐酸盐）的浓度为0.42 mg·L-1。 3.豚鼠心肌细胞动作电位记录: 通过查阅文献，多次总结，选用改良的酶解法分离获取单个心室肌细胞。用膜片钳全细胞电流钳技术，在20-22℃温度实验。用滴管吸取通过分离获得的细胞悬液数滴加入膜片钳装置的灌流槽中，待细胞缓慢沉降后，用电流记录外液进行灌流冲洗。实验选用的细胞应该是横纹清晰，边缘不卷曲，不收缩，在表面无颗粒。用微电极拉制仪将约1.1毫米的玻璃毛细管(Sutter instrument O.D.1.5mm，I.D.1.1 mm with filament)拉制成的备用电极一侧的尖端直径达到约为1μm。调节三维操纵器(Burleigh PCS-5000 Series)使电极移动至视野上方，缓慢调节电极入水（电阻在3-5 MΩ最好），再使用三维微调装置（EFOX pcs-5000系列）缓慢调节电极封接，待阻抗达到1 GΩ以上后补偿快电容，并给予负压破膜形成全细胞记录模式。为减少瞬时充放电电流和钳制电位误差，要及时进行串联电阻和慢电容补偿。 细胞外液灌流，其组成为(in mM): NaCl117，KCl5.7，MgCl2·6H2O1.7，NaHCO34.4，HEPES20，Glucose20，Taurine20（用NaOH将pH调节至7.3）。充灌了内液的电极入水阻抗约为2-5 MΩ，内液的组成为(in mM): KCl135，K2ATP3，EGTA10，Glucose5，TrisGTP0.5，AP10（用KOH将pH调节至7.1）。KB液的组成成分为(in mmM): KCl40，MgCl2·6H2O3,KH2PO420, L-glutamic acid50, KOH70, Taurine20, EGTA0.5, Glucose10，HEPES10，用NaOH将pH调为7.4。pClamp9.0记录在给药前后动作电位的变化，分析复极于50％和90％的动作电位时程APD50，APD90。 4.大鼠L型钙电流（左心室肌细胞）记录: 采用膜片钳全细胞记录技术，20-22℃下进行。采用改良的酶解法分离大鼠心脏，获取细胞悬浮液。用滴管吸取通过分离获得的细胞悬液数滴加入膜片钳装置的灌流槽中，待细胞缓慢沉降贴壁后，用电流记录外液灌流。实验选用的细胞应该是横纹清晰，边缘不卷曲，不收缩，在表面无颗粒。用微电极拉制仪将约1.1毫米的玻璃毛细管(Sutter instrument O.D.1.5mm，I.D.1.1 mm with filament)拉制成的备用电极一侧的尖端直径达到约为1μm。调节三维操纵器(Burleigh PCS-5000 Series)使电极移动至视野上方，缓慢调节电极入水（电阻在3-5 MΩ最好），再使用三维微调装置（EFOX pcs-5000系列）缓慢调节电极封接，待阻抗达到1 GΩ以上后补偿快电容，并给予负压破膜形成全细胞记录模式。为减少瞬时充放电电流和钳制电位误差，要及时进行串联电阻和慢电容补偿。钳制的电压是-80 mV，升至-40mV且维持20 ms（目的是使钠电流失活），之后给加大至0 mV，300 ms。在电压钳模式记录，给药前和给药后L型钙通道变化。 无钙灌流液(mmol/): NaCl117， KCl5.7， NaHCO34.4， NaH2PO41.5， MgCl21.7,HEPES20, Glucose20,Taurine10, pH用NaOH调至7.4。 KB液组成为为(mmol/L): L-glutamic acid50，KC140，KH2PO420，Taurine20，MgCl2·6H2O3, KOH70, EGTA0.5, HEPES10, Glucose10.pH用NaOH调至7.4。 结果: 1.双黄连中药注射剂合用肾上腺素对豚鼠在体心电图的影响: 双黄连中药注射剂10倍临床等效剂量可以使豚鼠的在体心率明显减慢，同时使P-R和QRS间期明显延长(p＜0.05)。而分别给予肾上腺素1/10倍和1/2倍剂量，均提高了10倍临床等效剂量的双黄连所致的缓慢心率，同时，明显缩短了10倍临床等效剂量的双黄连延长的P-R，QRS间期(p＜0.05)。 2.双黄连中药注射剂合用肾上腺素对豚鼠离体心电图的影响: 5倍(1.5 gL-1)双黄连注射剂能显著降低离体豚鼠心脏心率(P＜0.05)。双黄连5倍临床等效剂量（1.5 g·L-1）+肾上腺素5倍临床等效剂量(0.42 mg·L-1)能明显加快双黄连5倍剂量所致缓慢心率(p＜0.05)，同时，两药合用之后QTc间期（以心率矫正过的QT间期）显著缩短(p＜0.05)。而后用双黄连5倍临床等效剂量(1.5 g·L-1)进行洗脱，可再次使心率明显减慢，并使QTc延长(p＜0.05)。再用灌流液洗脱，各指标能恢复。 3.双黄连中药注射剂及其与肾上腺素合用对正常豚鼠心肌细胞动作电位的影响: 相比于给药前，双黄连中药注射剂10倍临床等效剂量(3 g·L-1)可使APD50及APD90显著延长(P＜0.05)，10倍临床等效剂量的双黄连(3 g·L-1)合用10倍临床等效剂量的肾上腺素(0.83mg·L-1)课明显缩短已延长的APD50 or APD90(P＜0.05)，使其接近于正常对照水平。 4.双黄连中药注射剂合用肾上腺素对正常大鼠心肌细胞L-Ca电流的影响: 双黄连中药注射剂0.15 g·L-1（0.5倍临床等效剂量）显著抑制L型钙电流(P＜0.05)，双黄连0.15 g·L-1（0.5倍临床等效剂量）+肾上腺素0.25mg.L-1（3倍临床浓度）有明显救治作用，双黄连0.15 g·L-1（0.5倍临床等效剂量）洗脱仍能显著抑制L型钙电流。 结论: 1.双黄连中药注射剂能使豚鼠的在体和离体心脏的心率均明显减慢，增大双黄连中药注射剂的剂量或者提高其浓度还能使P-R和QRS以及QTc间期明显延长。 2.在体和离体的实验数据均表明，双黄连注射剂可使豚鼠诱发缓慢型心律失常，之后再给予不同浓度的肾上腺素救治，则分别不同程度地提高了大剂量或高浓度的双黄连中药注射剂所致的缓慢心率，同时，还能明显改善双黄连中药注射剂引起的P-R，QRS间期的延长，明显缩短QTc。起到了很好的救治作用。 3.双黄连中药注射剂的浓度能使APD50及APD90显著延长，双黄连中药注射剂与肾上腺素合用能明显缩短已延长的APD50 or APD90。 4.双黄连中药注射剂能显著抑制L型钙电流，肾上腺素能显著地对抗双黄连中药注射剂对L型钙电流的抑制作用。 5.基于肾上腺素以上的对抗作用，临床上肾上腺素可用于抢救双黄连中药注射剂所致的缓慢性心律失常。