【摘 要】
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ENF肽是一类存在于鳞翅目昆虫中,一级结构非常保守的多肽,具有诱导昆虫麻痹、血细胞扩散、抑制幼虫生长和家蚕卵滞育等多种生物学功能。本研究用离子通道的特异性调制剂,对昆虫E
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ENF肽是一类存在于鳞翅目昆虫中,一级结构非常保守的多肽,具有诱导昆虫麻痹、血细胞扩散、抑制幼虫生长和家蚕卵滞育等多种生物学功能。本研究用离子通道的特异性调制剂,对昆虫ENF肽--天蚕麻痹肽(Antheraea yamamai paralytic peptide,AnyPP)诱导家蚕麻痹、卵滞育和人类细胞增殖作用的离子通道相关机制进行了初步探讨。诱导家蚕幼虫麻痹结果表明,用AnyPP注射五龄起蚕,有明显的诱导麻痹效应,并且呈剂量依赖性,有效剂量范围为0.4-1.6 nmol/蚕。用离子通道特异性抑制剂和激活剂(抑制钠离子通道的河豚毒素Tetrodotoxin,TTX;延缓钠通道失活的东亚钳蝎毒BmK I;BK通道抑制剂Iberiotoxin,IbTX;BK通道激活剂Phloretin;L型钙通道激活剂Bay;L型钙通道阻断剂Nifedipine)与AnyPP混合注射,结果表明只有BK通道特异性抑制剂IbTX可以减缓AnyPP对家蚕的麻痹作用,暗示ENF肽诱导家蚕麻痹过程可能有BK通道的参与。同时,结扎实验中发现,在家蚕幼虫的胸腹部结扎,阻断血液循环,分别在胸或腹部注射AnyPP,只引起注射区段麻痹。去头蚕注射AnyPP,同样能引起麻痹,这些结果暗示ENF肽诱导家蚕麻痹与中枢神经系统的传导调节无关,可能是通过体液扩散发挥作用。此外,用离子通道特异性的药物注射蚕蛹,对所产卵的滞育性质没有影响。
昆虫ENF肽具有促进细胞增殖的作用。本实验,用AnyPP对人类胶质瘤细胞U251和人类胚胎肾脏细胞HEK293t的生长作用进行了研究,结果表明,AnyPP促进U251和HEK293t细胞的生长,25nM时增殖效应达到最大。而且这种增殖效应随着培养时间的延长而增大,在检测的48h内,具有持续的增殖作用。为了检测AnyPP对细胞生长促进的机制,用EGF受体(EGFR)的抑制剂methyl 2,5-dihydroxycinnamate(2,5-MC)与AnyPP共同培养.HEK293t细胞,2,5-MC明显的抑制了AnyPP对细胞的增殖效应,暗示AnyPP可能是通过EGFR促进细胞增殖。
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