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目的:探讨可溶性CD40配体(sCD40L)对人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖、凋亡以及凋亡相关基因BAG-1和Bax mRNA表达的影响。
方法:(1)采用CCK-8法检测不同浓度sCD40L对慢性粒细胞白血病K562细胞株体外增殖的影响，确定最佳干预浓度;(2)采用CCK-8检测不同时间内sCD40L对K562株体外增殖的影响;(3)采用Annexin V-FIT荧光标记法检测细胞凋亡;(4)通过实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测sCD40L对K562细胞BAG-1及Bax mRNA表达的影响。
结果:(1)不同浓度sCD40L对K562细胞作用48小时后均有不同程度的抑制的作用，与细胞对照组及IFN-α组比较，均有显著差异(p＜0.05），其中浓度为2μg/ml、4μg/ml对慢粒K562细胞抑制作用较明显;(2)CCK-8法结果显示K562细胞与sCD40L共育24-72h后，均有抑制细胞增殖作用，同一时间内以sCD40L4.00μg/ml组抑制率最高(p＜0.05)，同一浓度、不同作用时间下，72h抑制作用最明显。(3)AnnexinV-FITC/PI双染色显示，K562细胞与sCD40L组共育24-72h后，均见明显凋亡，同一时间内以sCD40L4.00μg/ml组凋亡现象最为显著，但与IFN-α组比较无显著差异(P＞0.05）。同一浓度、不同时间下，在72h K562细胞凋亡最明显;(4)实时荧光定量PCR测定结果显示sCD40L4.00μg/ml组BAG-1mRNA、Bax mRNA的表达与细胞对照组、IFN-α组比较均有显著差异（P＜0.05），且在同一时间内BAG-1mRNA的表达在sCD40L4.00μg/ml下调最为显著(p＜0.05)，而Bax mRNA的表达在sCD40L4.00μg/ml上调最为显著(p＜0.05）;在不同时间内，两种基因的表达量与时间有相关性。
结论:(1) sCD40L在体外能够抑制K562细胞增殖，诱导K562细胞发生凋亡，与作用浓度、时间相关;(2) sCD40L抗白血病作用，对K562细胞作用机制与下调BAG-1 mRNA表达、上调Bax mRNA表达相关，可能是通过线粒体信号途径完成的。