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目的:
将水通道蛋白1作为研究中药方剂五苓散治疗作用的靶点,模拟在肾阳虚的情况下,若发生水液代谢失常时,观察水通道蛋白1在人体内的表现,并研究不同剂量下的五苓散汤剂对治疗肾阳虚水肿的效果,通过此次实验研究,希望可以找出机体水液代谢的失常的根本原因或影响水液代谢的关键物质,并对今后学者研究此类水液代谢问题时可以以此为基础,发现更多较好的给药途径甚则优化的治疗方案,导师多年治疗肾阳虚水泛类患者的心得可知,经典方剂五苓散在治疗该类疾病时效果优良,且组方中每种药物安全性无毒,药性温和作用力持久,选用该方作为给用药物,观察实验大鼠水液代谢改变情况,以及进一步了解不同情况大鼠的水通道蛋白1表达情况。
方法:
将60只SPF级别雄性大鼠随机分为6组,每组10只,空白组(NG)、阳虚对照组(MG)五苓散低剂量组(WLS-L)、五苓散等剂量组(WLS-M)、五苓散高剂量组(WLS-H)和西药呋塞米组(F)。NG组和MG组灌胃生理盐水,低中高三组五苓散的给药量分别为0.13g/Kg、0.26g/Kg、0.52g/Kg,西药呋塞米组(F)给药量为0.3mg,每日两次,通过大鼠自身状态改变以及一些生理方面的改变,结合测取每日大鼠尿量中蛋白质含量情况比较,参照中医肾阳虚诊断标准,评价造模情况后,得出造模成功。利用代谢笼结构系统测得各组大鼠尿液总质量,随后取得实验大鼠肾脏并经过一些列处理,应用免疫组化、RT-PCR、Western Blot对各组实验大鼠肾脏水通道蛋白1蛋白和mRNA表达状态观察分析与研究,进一步得出结论与期望。
结果:
1、肾阳虚水肿模型大鼠制备完成后,会有一系列生理病理改变状,甚至精神状态会出现相关的变化。例如,模型大鼠造模前,灵活自如,造模后则精神萎顿。在生理病理方面的改变有:大鼠四肢蜷缩怕冷,喜欢簇拥一团,饮食减少,大便稀薄溏泄,24h尿量明显变少,而24h尿液中蛋白质含量却大幅度增加。参考中医肾水肿标准,提示造模成功。
2、将模型大鼠与空白组大鼠一起经过给药治疗后,中药方剂五苓散各组与西药呋塞米组均可见到治疗效果,程度有所不同。与模型组相比五苓散低、中、高剂量组和呋塞米组大鼠均有不同程度的体温升高,具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比五苓散低、中、高剂量组和呋塞米组大鼠体重增加,具有显著性(P<0.01);与模型组相比,五苓散低、中、高剂量组和呋塞米组大鼠肾脏中AQP-1蛋白浓度下降,具有统计学意义(P<0.05),其中五苓散中、高剂量组降幅较大;通过免疫组化法、RT-PCR法和Western Blot法检测,无论在mRNA水平或蛋白水平,与模型组相比,给药组大鼠肾脏中AQP-1均降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论:
1、根据实验具体过程,可以发现在五苓散经典方剂的药量基础上,将散剂制成汤剂仍然有效且对治疗肾阳虚引起水肿效果较好,使用不同剂量的五苓散进行治疗效果不一样,其中使用中等剂量和高剂量的五苓散治疗效果最佳。
2、五苓散方剂的利尿作用与抑制肾脏中AQP-1蛋白表达有关联,利尿效果越明显时,AQP-1表达越低,反之随利尿效果降低,AQP-1却表达增加。
将水通道蛋白1作为研究中药方剂五苓散治疗作用的靶点,模拟在肾阳虚的情况下,若发生水液代谢失常时,观察水通道蛋白1在人体内的表现,并研究不同剂量下的五苓散汤剂对治疗肾阳虚水肿的效果,通过此次实验研究,希望可以找出机体水液代谢的失常的根本原因或影响水液代谢的关键物质,并对今后学者研究此类水液代谢问题时可以以此为基础,发现更多较好的给药途径甚则优化的治疗方案,导师多年治疗肾阳虚水泛类患者的心得可知,经典方剂五苓散在治疗该类疾病时效果优良,且组方中每种药物安全性无毒,药性温和作用力持久,选用该方作为给用药物,观察实验大鼠水液代谢改变情况,以及进一步了解不同情况大鼠的水通道蛋白1表达情况。
方法:
将60只SPF级别雄性大鼠随机分为6组,每组10只,空白组(NG)、阳虚对照组(MG)五苓散低剂量组(WLS-L)、五苓散等剂量组(WLS-M)、五苓散高剂量组(WLS-H)和西药呋塞米组(F)。NG组和MG组灌胃生理盐水,低中高三组五苓散的给药量分别为0.13g/Kg、0.26g/Kg、0.52g/Kg,西药呋塞米组(F)给药量为0.3mg,每日两次,通过大鼠自身状态改变以及一些生理方面的改变,结合测取每日大鼠尿量中蛋白质含量情况比较,参照中医肾阳虚诊断标准,评价造模情况后,得出造模成功。利用代谢笼结构系统测得各组大鼠尿液总质量,随后取得实验大鼠肾脏并经过一些列处理,应用免疫组化、RT-PCR、Western Blot对各组实验大鼠肾脏水通道蛋白1蛋白和mRNA表达状态观察分析与研究,进一步得出结论与期望。
结果:
1、肾阳虚水肿模型大鼠制备完成后,会有一系列生理病理改变状,甚至精神状态会出现相关的变化。例如,模型大鼠造模前,灵活自如,造模后则精神萎顿。在生理病理方面的改变有:大鼠四肢蜷缩怕冷,喜欢簇拥一团,饮食减少,大便稀薄溏泄,24h尿量明显变少,而24h尿液中蛋白质含量却大幅度增加。参考中医肾水肿标准,提示造模成功。
2、将模型大鼠与空白组大鼠一起经过给药治疗后,中药方剂五苓散各组与西药呋塞米组均可见到治疗效果,程度有所不同。与模型组相比五苓散低、中、高剂量组和呋塞米组大鼠均有不同程度的体温升高,具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比五苓散低、中、高剂量组和呋塞米组大鼠体重增加,具有显著性(P<0.01);与模型组相比,五苓散低、中、高剂量组和呋塞米组大鼠肾脏中AQP-1蛋白浓度下降,具有统计学意义(P<0.05),其中五苓散中、高剂量组降幅较大;通过免疫组化法、RT-PCR法和Western Blot法检测,无论在mRNA水平或蛋白水平,与模型组相比,给药组大鼠肾脏中AQP-1均降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论:
1、根据实验具体过程,可以发现在五苓散经典方剂的药量基础上,将散剂制成汤剂仍然有效且对治疗肾阳虚引起水肿效果较好,使用不同剂量的五苓散进行治疗效果不一样,其中使用中等剂量和高剂量的五苓散治疗效果最佳。
2、五苓散方剂的利尿作用与抑制肾脏中AQP-1蛋白表达有关联,利尿效果越明显时,AQP-1表达越低,反之随利尿效果降低,AQP-1却表达增加。