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研究目的:鉴定Smurf1的两种不同剪接异构体，对其功能进行初步研究。
研究方法:Western blotting检测小鼠12种组织和9种细胞系中Smurf1(Smurf1 S和Smurf1 L)的蛋白质表达水平，利用商品化的12种成人组织和10种人胚胎组织的cDNA文库，PCR检测两种Smurf1异构体在人体组织中的mRNA水平;间接免疫荧光法确定Smuff1在亚细胞中的定位;在人胚肾T细胞HEK293T细胞中共转染Smurf1和Smad5检验Smurf1不同异构体对底物降解的影响;免疫共沉淀实验检测两种异构体与Smad5/CKIP-1的相互作用;泛素化实验检测Smurf1两种异构体的自身泛素化。
研究结果:
1、Smurf1 S在小鼠的心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠、脑、子宫、膀胱、胰腺和骨骼肌组织中表达，而Smurf1 L则存在于小鼠的心、肝、肺、胃和骨骼肌中。Smurf1 S在HCT116+/+、HCT116-/-、MCF-7、Hela、HEPG2、Chang、 HEK293T、U2Os、H1299细胞系中都有表达，而Smurf1 L在细胞系仅存在于HCT116+/+、Chang、 U2Os、H1299细胞系中。Smurf1 L在成人胃、肾和肺组织中高表达，在卵巢、骨骼肌、脊髓和乳腺中有少量表达。Smurf1 L在人胚心脏、胃、肺、脾和骨骼肌组织中高表达。
2、Smurf1 S定位于H1299/HEK293T细胞胞质中，而Smurf1 L定位于细胞膜上。且Smurf1 L在H1299细胞有丝分裂期定位于纺锤体上。
3、随着Smurf1 S表达量的升高，Smad5的蛋白质水平呈明显下调;而随着Smurf1 L表达量的升高，Smad5的蛋白质水平呈现出一个先上升后下降的趋势。
4、Smurf1 S与Smad5的相互作用强于Smurf1 L与Smad5的相互作用，Smurf1 S与CKIP-1的相互作用也比Smurf1 L与CKIP-1强。
5、Smurf1 L的自身泛素化水平略高于Smurf1 S。
研究结论:
1、Smurf1的两种异构体在组织的表达分布不同，Smurf1 S存在于大多数组织中，而Smurf1 L只特异性存在于心、肺、胃和骨骼肌中。
2、Smurf1 S与Smurf1 L的亚细胞定位完全不同，并且Smurf1 L定位于纺锤体中，其功能可能与细胞周期相关。
3、Smurf1 L与Smurf1 S对底物的降解能力不同。
4、Smurf1 L多出的26个氨基酸影响Smurf1与其WW结构域结合的蛋白质的相互作用。