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目的:双微体(double minute chromosomes,DMs)是基因扩增的主要细胞遗传学标志,是染色体外遗传单位的一种主要存在形式。本实验通过对DMs序列上高扩增基因在细胞水平、临床组织病例筛选,确定DMs上高扩增基因在卵巢癌组织中表达差异基因。进一步分析与卵巢癌发生相关的基因,用于卵巢癌临床早期诊断的应用有着重要的意义。
方法:首先培养人卵巢癌细胞UACC-1598,并做核型分析鉴定,确认双微体。应用Arry-CGH芯片对UACC-1598细胞系双微体进行序列分析,初步确定基因组DNA高扩增区域,确认部分1、2、3号染色体基因扩增。通过半定量PCR及Real-time PCR方法对CGH高扩增区域基因进行验证,细胞系检测及临床卵巢癌组织表达统计分析。应用T检验统计学方法初步确定UACC-1598细胞1号、3号、19号上高扩增基因及其在卵巢癌组织中的表达有统计学差异。
结果:初步在UACC-1598细胞中扩增的基因有17个。
通过实验验证,初步在卵巢癌组织中表达上调有统计学差异的基因有ECM1,EIF5A2,HORMAD1,CLDN11,TNIK,GPR160。
通过组织免疫组化实验发现在100多例卵巢癌组织中蛋白表达上调并且有统计学意义的基因为ECM1、EIF5A2、RPL22L1,其组织分型阳性率具有统计学意义。
结论:本实验对UACC-1598细胞中DMs CGH结果中高扩增基因通过DNA水平、RNA水平、蛋白水平验证筛选发现ECM1、EIF5A2,HORMAD1、CLDN11、TNIK、GPR160在细胞水平高表达并在卵巢癌组织中表达有差异上调。ECM1、EIF5A2、RPL211在组织表达上调明显。