【摘 要】
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目的：通过研究不同剂量的降糖三黄片2号对体外原代培养大鼠胰岛细胞凋亡的影响,探讨降糖三黄片2号治疗和改善胰岛细胞凋亡的作用机制,进一步揭示降糖三黄片2号改善胰岛细胞凋
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目的：通过研究不同剂量的降糖三黄片2号对体外原代培养大鼠胰岛细胞凋亡的影响,探讨降糖三黄片2号治疗和改善胰岛细胞凋亡的作用机制,进一步揭示降糖三黄片2号改善胰岛细胞凋亡的作用途径。方法：通过胆总管逆流灌注胶原酶V、原位消化及Ficoll-400梯度分层法分离纯化大鼠胰岛细胞,MTT法检测不同浓度降糖三黄片2号对IL-1β刺激下胰岛细胞活性影响筛选出有效浓度范围,使用NO检测试剂盒测定降糖三黄片2号对IL-1β刺激下胰岛细胞培养液中NO含量变化,同时RT-PCR检测降糖三黄片2号对IL-1β刺激下胰岛细胞内iNOS、caspase-3表达的影响,Western Blot检测IL-1β刺激下iNOS与P38、JNK的表达。结果：1.采用胆总管逆流灌注、原位消化及Ficoll-400梯度分层法,可以制备出形态、功能较好的原代大鼠胰岛细胞。2.通过MTT比色法筛选出降糖三黄片的有效药物浓度范围,其低、中、高剂量分别确定为50μg/ml、100μg/ml及200μg/ml。3.IL-1β作用胰岛细胞24h后,PT-PCR检测胰岛细胞培养液发现NO含量明显升高,同时RT-PCR也发现胰岛细胞内iNOS、caspase-3随之相应升高,提示IL-1β可上调胰岛细胞iNOS表达,合成过多的N0,引起caspse-3表达增加,最终导致凋亡增多,Western Blot发现iNOS表达的增加与MAPK家族中P38、JNK的增多密切相关。4.降糖三黄片可作用于NO依赖途径,抑制炎症(IL-1β)介导的胰岛β细胞凋亡,但作用效果呈浓度依赖性。结论：降糖三黄片2号可以减轻炎症(IL-1β)诱导的胰岛β细胞凋亡,其机制与其下调iNOS.减少NO的合成及抑制caspase-3的表达有关。
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