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目的:从6种中药组分中,筛选出抑制肝星状细胞(HSC)迁移的最佳中药组分及其最佳作用浓度;并研究该组分抑制HSC迁移的作用环节。
方法：1.选择青蒿琥酯、灯盏花素、红景天甙、丹参酚酸B、粉防己碱和黄芪总甙,取10-4M-10-7M浓度范围,采用“Transwell双腔实验”模型,以人HSC细胞株(LX-2)为研究对象,经血小板衍生生长因子-BB(10ng/ml)诱导后,筛选出抑制LX-2迁移的最佳中药组分及其最佳作用浓度。2.围绕已知与HSC迁移相关的PDGF胞内信号传导通路,运用不同通路的激酶阻断剂,在阻断1条至3条通路的条件下,以Transwell检测应用最佳浓度的最佳中药组分后,比较各组LX-2迁移情况;以Western Blot分析法依次检测各条信号传导通路中关键激酶的蛋白表达及其磷酸化表达,从中揭示出中药组分抑制PDGF诱导的LX-2迁移的作用环节。
结果：(1)PDGF可有效诱导LX-2的迁移;10-4M青蒿琥酯、10-4M灯盏花素、10-5M红景天苷、10-5M丹参酚酸B盐、10-6M粉防已碱、10-6M黄芪总甙,均能显著抑制LX-2迁移;其中,10-5M的红景天苷抑制PDGF诱导的LX-2迁移的效果在6种中药组分中最佳,有显著性差异(P＜0.05)。(2)证实PDGF的Ras/MEPK信号通路未介导LX-2的迁移,FAK-PI3K信号通路介导LX-2的迁移并调节LX-2迁移运动方式。(3)红景天苷对于PDGF受体表达无影响、对ERK与FAK的蛋白表达及其磷酸化表达均无影响。(4)红景天苷抑制PDGF在LX-2内FAK-PI3K信号通路,对通路FAK分支中的Racl激酶的磷酸化有显著抑制作用、对PI3K信号通路的下游激酶AKT的磷酸化表达有显著抑制作用、对PI3K信号通路的下游通路分支CDC42通路中的CDC42、PKA1和MLC3个激酶的磷酸化表达都明显抑制,同时抑制了LX-2的迁移。
结论：(1)10-4M青蒿琥酯、10-4M灯盏花素、10-5M红景天苷、10-5M丹参酚酸B盐、10-6M粉防已碱、10-6M黄芪总甙,分别是这6种组分中抑制PDGF诱导LX-2辽移的最佳工作浓度。(2)在上述浓度的6种中药组分中,10-5M的红景大苷抑制PDGF诱导的LX-2辽移的效果最佳。(3)红景天苷抑制PDGF诱导LX-2辽移的作用环节,在于抑制了Racl、AKT、和CDC42的磷酸化表达。