【摘 要】
：
目的:肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌占肺癌总发病率的85%,这其中大约50%为肺腺癌。由于肺腺癌病因尚不明确,且早期缺少明显的临床症状,易被忽略,而治疗方法仍然是以外科手术切除为主,辅以放疗和化疗。由此可见,对肺腺癌发生发展的分子机制的研究,以及寻找合适的基因靶点对肺腺癌的早期诊断和后期治疗有着重要意义。近几年的研究报道结果显示PRDM5因启动子区CpG岛高甲基化导致其在多种癌症中
论文部分内容阅读
目的:肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌占肺癌总发病率的85%,这其中大约50%为肺腺癌。由于肺腺癌病因尚不明确,且早期缺少明显的临床症状,易被忽略,而治疗方法仍然是以外科手术切除为主,辅以放疗和化疗。由此可见,对肺腺癌发生发展的分子机制的研究,以及寻找合适的基因靶点对肺腺癌的早期诊断和后期治疗有着重要意义。近几年的研究报道结果显示PRDM5因启动子区CpG岛高甲基化导致其在多种癌症中沉默,包括乳腺癌,卵巢癌,结肠直肠癌,胃癌和子宫颈癌等。实验室前期进行的芯片检测结果显示PRDM5在肺腺癌组织中低表达,但是其在肺腺癌的发生发展中是否发挥着抑癌基因的作用目前尚不清楚。因此,本课题通过构建PRDM5相关的肺腺癌细胞模型,研究PRDM5对肺腺癌的细胞生物学行为及发生发展的影响,旨在为肺腺癌的早期诊断及分子靶向治疗提供帮助。方法:本课题主要分为三个部分。第一部分,首先利用蛋白质免疫印迹(Western blot)、实时荧光定量PCR(qPCR)等技术检测正常肺支气管上皮细胞以及几种肺腺癌细胞系中PRDM5的mRNA和蛋白的表达情况;利用相关数据库分析PRDM5在肺腺癌和癌旁组织之间的表达差异,利用Kaplan–Meier生存曲线分析PRDM5的表达水平与肺腺癌患者预后的相关性。第二部分,我们使用慢病毒表达载体构建了稳定过表达PRDM5的A549和H1975细胞系。在具有较高PRDM5表达水平的A549细胞和H1299细胞中,使用RNA干扰技术来敲低PRDM5的表达。通过CCK8实验和平板克隆实验对肺腺癌细胞的增殖能力进行检测。第三部分,基于RNA-seq技术,将与对照组相比过表达PRDM5蛋白后的A549细胞中的差异基因进行筛选,利用Western blot、qPCR、GLuc-ON启动子报告基因系统等技术检测PRDM5对差异基因的调控以及对所涉及的信号通路进行验证。结果:第一部分:与人正常支气管上皮细胞BEAS-2B相比,不同来源的肺腺癌细胞系中PRDM5的mRNA水平和蛋白水平都明显下降;GEO数据库统计分析结果显示与正常肺组织相比,肺腺癌组织中PRDM5低表达;Kaplan–Meier生存曲线结果表明,PRDM5的表达水平与肺腺癌患者的生存率呈正相关。第二部分:成功构建过表达PRDM5蛋白的重组慢病毒质粒,可以在A549及H1975细胞中稳定表达PRDM5;过表达PRDM5能够抑制A549及H1975细胞的增殖能力;而在A549及H1299细胞中敲低PRDM5则可促进细胞的增殖。第三部分:利用RNA-seq技术,通过对差异基因GO功能富集与KEGG信号通路富集的分析显示,SOCS1可能作为PRDM5的下游靶点,研究结果显示PRDM5在mRNA水平上促进SOCS1的表达,通过GLuc-On启动子报告基因实验我们还发现PRDM5增强了SOCS1的启动子活性。在过表达PRDM5的A549细胞中,磷酸化JAK2和磷酸化STAT3的表达与对照组相比明显降低。结论:PRDM5在肺腺癌组织及细胞系中低表达。过表达PRDM5之后能够抑制肺腺癌细胞的增殖,而敲低PRDM5则可以促进肺腺癌细胞增殖。PRDM5能够通过调节SOCS1的启动子活性激活SOCS1的表达,进而抑制JAK/STAT信号通路相关蛋白的活化。这一系列的研究结果将为基于PRDM5的肺腺癌特异性靶向治疗提供新思路。
其他文献
草坪在我国城市绿地中所占的比例极大,由于北方季节性明显,温度变化幅度较大,而单一的草坪植物往往在后期养护管理不善,极易受环境胁迫的影响,致使草坪杂草化。外来植物两栖蔊菜[Rorippa amphibia(L.)Besser]是近几年入侵辽宁省城市草坪的根蘖型杂草,已形成大面积的优势群落,不仅对草坪的美观性、以及群落生态系统造成巨大的破坏,也会给我国的经济带来巨大的损失,同时有不断向周围城市扩散的趋
目的:研究发现重性抑郁障碍(major depressive disorder,MDD)患者的脑白质存在微结构的改变。弥散张量成像(Diffusion tensor imaging,DTI)方法探测脑白质完整性已被广泛应用
杧果是著名热带水果,被称为“热带果王”,近年来随着杧果种植产业的持续扩增,使得杧果产区农业经济得到快速发展,同时杧果病虫害的种类随着种植面积的扩大也越来越多。近两年本课题组在广东、四川等杧果产区病虫害普查时发现了一种危害逐渐加重的细菌性病害。杧果的叶片和枝条在染病初期呈现不规则的黑褐色斑圈,中期病斑向四周蔓延,前期出现的症状与细菌性角斑病相似,但后期染病的叶片和枝条干枯坏死,与细菌性角斑病后期出现
西班牙作曲家格拉纳多斯(Enrique Granados,1867-1916)是西班牙古典音乐和西班牙民族乐派的重要代表人物,他作于1892-1900年间的《十二首西班牙舞曲》(12 danzas espa?olas,Op.37)是早期西班牙专业音乐和十九世纪钢琴音乐文献的代表作。本文以格拉纳多斯《十二首西班牙舞曲》的前五个乐章为研究对象,旨在通过对各乐章的体裁属性与结构趣味的分析考察,明确各乐章
翻转课堂教学模式打破了以往传统教学中“以教促学”的现状,在课前进行知识的传递,在课上进行知识的内化,这种“以学定教”的教学方式,突出了学生的主体地位,提高了教师的教学效率。古诗词作为我国优秀传统文化之一,既能提高学生的文化素养,又能增强学生的文化自信。部编版义务教育语文教科书中大幅增加了古诗词的数量比重,说明了古诗词学习的重要性,但是也给教师的教学带来了一定的挑战。在教育信息化的趋势下,信息技术与
葡萄是我国主要种植的果树树种之一,由于品种的不断更新与耕地面积的限制,导致葡萄连作障碍的问题愈发严重,这严重制约葡萄产业的健康可持续发展。对羟基苯甲酸(ρ-hydroxybenzoic acid,4-HBA)是导致葡萄连作障碍的主要化感物质之一,本研究以贝达(Beta V.riparia×V.labrusca)葡萄实生苗为试材,将其种植在不同肥力的土壤(长年未施肥土壤NK,施低量氮肥土壤NL,施高
草莓作为一种小浆果,色泽鲜艳,风味浓郁,富含多种营养物质,同时生产周期短,效益高,近年来被广泛种植。产量和果实品质是决定生产效益的两个要素。‘艳丽’草莓是沈阳农业大学选育的优良草莓新品种,但是在促成栽培条件下其产量和品质变化很大,因此,探索‘艳丽’草莓高产、优质栽培技术体系具有重要意义。本研究以‘艳丽’草莓为试材,在日光温室促成栽培模式下,探究促进根系发育物质、疏果、定植时期、补光等对草莓植株长势
亲子关系作为影响儿童成长发展的一大要素,是社会学、心理学、教育学等学科领域研究的核心,也是儿童文学的重要叙事主题。亲子关系能否成功构建决定了儿童文学译作在读者中的受欢迎程度。亲子对话之于亲子关系的构建意义非凡。《草原上的小木屋》是美国经典名著《小木屋》系列小说中最有名最具代表性的作品。通过亲子对话,作品传神地描绘出父母和孩子在日常生活中的沟通交流与情感表达,展示出亲子间的温馨与美好。本研究以《草原
二化螟Chilo suppressalis(Walker)是我国水稻生产上危害最为严重的常发性害虫之一,每年造成数亿元的损失。化学杀虫剂是目前防治二化螟的最有效的手段,但由于长期依赖和不合理的过量使用,防治成本逐渐提高,而且还造成环境污染、引发昆虫抗药性等问题。因此,构建新型绿色防控技术是势在必行的。筛选和利用抗虫品种,能有效控制害虫且不会对环境产生负面影响。利用植食性昆虫取食诱导的植物防御机制和
目的:端粒对基因组的稳定性起着重要作用,端粒功能异常与疾病的发生息息相关。包括G四链体在内的高级结构,会引起端粒功能障碍,阻碍端粒酶识别并抑制端粒延长,导致端粒缩短。研究表明,一些小分子配体可以结合并稳定该结构,引起端粒DNA损伤并抑制端粒酶活性,进而抑制癌症的发生。然而,我们发现端粒酶可以修复这些端粒异常。在这里,我们试图回答G4稳定性配体和端粒酶抑制剂的联合应用是否可以诱导长期DNA损伤并抑制