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食管癌(Esophageal cancer)是我国常见的消化系统恶性肿瘤之一。化疗仍然是晚期食管癌的主要治疗手段,但多数化疗药物因毒性大、疗效差及易产生耐药等因素限制了其在临床应用。因此,寻找高效、低毒药物或者改变原有药物的治疗方式,减少药物耐药的发生就显得尤为必要。近年来,靶向治疗在食管癌中的研究越来越多。虽然抗血管生成靶向治疗在晚期食管癌中取得了一定的临床效果,但是总的来说,其疗效并不佳,因此,如何更优化使用抗血管生成治疗药物从而获得更大的临床收益值得研究。同大多数临床上已应用的分子靶向治疗药物类似,天然或获得性耐药的产生是抗血管生成治疗药物疗效不佳的重要原因。自噬作为细胞对环境伤害刺激的一种保护性机制,在细胞对药物治疗反应过程中起着重要的作用,与肿瘤耐药密切相关。现有的抗肿瘤治疗方法如化学治疗、放射治疗以及生物靶向治疗等均可调节自噬,而临床上血管生成抑制剂恩度治疗晚期食管癌疗效不佳的原因是否与其活化自噬从而诱导肿瘤细胞耐药的产生相关,目前尚不明确。目的研究血管内皮抑素恩度对食管癌细胞自噬的作用;分析血管内皮抑素恩度调控自噬的可能分子机制;进一步分析自噬抑制在食管癌细胞对血管内皮抑素恩度治疗中的作用。方法通过免疫荧光、透射电镜、蛋白印记技术(Western blot)分析经血管内皮抑素恩度处理后食管癌细胞系Eca-109、TE-1中自噬关键基因的表达情况;采用Western blot分析经血管内皮抑素恩度处理后食管癌细胞VEGFR下游Akt/mTOR信号通路的表达情况;采用MTS方法观察经自噬抑制剂抑制自噬后,食管癌细胞Eca-109、TE-1对血管内皮抑素恩度的反应性;采用流式细胞术观察经血管内皮抑素恩度单药或联合自噬抑制剂后处理后食管癌细胞凋亡情况。构建裸鼠移植瘤模型,观察在体内情况下,经自噬抑制剂抑制自噬后血管内皮抑素恩度对肿瘤的抑制作用。结果1.体外试验中,血管内皮抑素恩度在0~200 ug/ml浓度范围内对Eca-109,TE-1食管癌细胞株有抑制增殖作用。血管内皮抑素恩度作用于Eca-109,TE-1食管癌细胞株72h后的IC50分别为67.23±8.42 ug/mL和75.39±11.56 ug/ml。2.血管内皮抑素恩度诱导食管癌细胞LC3-I向LC3-II转换增多,而自噬相关基因p62蛋白表达降低,Beclin-1蛋白表达及自噬体数目增加。3.血管内皮抑素恩度抑制VEGFR下游Akt/mTOR磷酸化水平。食管癌细胞中,CQ联合血管内皮抑素恩度组LC3-I/LC3-II比值降低。4.体外研究表明自噬抑制剂抑制自噬可以促进血管内皮抑素恩度对食管癌细胞的增殖抑制作用。血管内皮抑素25ug/ml作用于Eca-109细胞24小时后,其抑制率为15%左右。联合CQ后其抑制作用分别为46%。流式细胞仪检测结果提示同血管内皮抑素恩度单药时的凋亡率14.78±3.42%相比,联合CQ后,Eca-109食管癌细胞凋亡率增加至46.27±5.61%。5.体内研究表明用自噬抑制剂抑制自噬后提高了血管内皮抑素恩度对食管癌细胞的体内抑制作用。同血管内皮抑素单药组相比,联合给药组裸鼠移植瘤的体积、重量均显著降低。结论血管内皮抑素恩度体内、外均可激活食管癌细胞保护性自噬。抑制VEGFR下游Akt/mTOR磷酸化可能是血管内皮抑素恩度诱导食管癌细胞自噬的潜在机制。抑制自噬可以提高血管内皮抑素恩度体内、外对食管癌细胞的抑制作用,促进肿瘤细胞细胞凋亡。在食管癌细胞中,抑制自噬可以提高肿瘤细胞对血管内皮抑素恩度的敏感性。