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在酵母细胞自噬研究中，最常用的检测细胞自噬的方法之一是用荧光蛋白标记自噬相关蛋白。在我们的实验研究中，会经常用到带有荧光蛋白标签的融合蛋白。具体构建方法是在PCR引物中加上45bp左右的目的基因同源片段，然后用扩增的PCR片段转化酵母，通过酵母细胞的同源重组在目的蛋白的C端连接上荧光蛋白。在大量的实验研究中，我们发现这种构建融合蛋白的方法是相当低效的。酵母细胞中基因同源重组的正确率，在很大程度上取决于两个基因同源片段的长度。由于PCR引物长度的限制，这个加在PCR引物上的同源片段的长度也是有限的，另外PCR过程中也会存在一定概率的突变。为了提高我们的实验效率同时降低试验误差，我们构建了两组质粒，用于快速的构建自噬相关蛋白和GFP的融合蛋白。这些质粒的构建原则仍然是利用酵母基因同源重组，但是扩大了同源片段的长度，这样融合蛋白菌株的构建正确率从原来的10％左右提高到了现在的80％以上。并且构建过程中不再需要PCR，这两组质粒在很大程度上提高了我们的实验效率和实验的重复性。 细胞自噬被诱导之后，Atg8通过与脂类分子PE结合，锚定在自噬体膜上。另外有研究指出，Atg8在介导膜延伸的过程中起作用，因此Atg8可以作为标记来追踪细胞自噬的诱导以及细胞自噬的发展过程。根据实验的需要研究者们构建了GFP-Atg8和RFP-Atg8、cherry-Atg8、tomato-Atg8、dsred-Atg8等融合蛋白用来标记PAS，GFP-Atg8在信号强度和蛋白功能上都是比较理想的。但是这些红色荧光蛋白标记的Atg8融合蛋白信号很弱，并且融合蛋白的功能也很差，我们希望找到更好的红色荧光蛋白用来标记Atg8。 本论文致力于构建2*dsred和4*dsred以及通过换用不同的连接多肽和启动子希望能在信号强度上和蛋白功能上能够改造出更好的红色荧光蛋白标记的Atg8。到目前为止我们我们找到了一个在信号强度上有很大改进并且蛋白功能有所提高的4*dsred-Atg8，结合我们所构建的两组其他自噬相关蛋白的GFP融合蛋白的质粒，我们可以很方便的研究不同的自噬相关蛋白以及Atg8在PAS的共定位情况，从而进一步去深入研究细胞自噬发生的具体机制。