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食管癌是消化系统常见恶性肿瘤之一，在我国，其死亡率仅次于肺癌、胃癌和肝癌，列第四位，严重威胁人民的生命健康。由于大多数食管癌发病隐匿，多数患者就诊时已属中晚期，失去了手术或放疗的时机；因此，全身性化学药物治疗在食管癌的综合治疗中占有越来越重要的地位。化疗无论作为中晚期食管癌患者的主要治疗手段，或是作为围手术期的辅助治疗，对延长患者生存期，提高生活质量都发挥着重要的作用，特别是术前化疗的提出和应用，使食管癌的综合治疗水平得到进一步提高。正是基于上述原因，愈来愈多的研究者将目光投向了食管癌的化学治疗：(1)新药的开发，新方案的制定是众多研究的焦点。(2)进一步阐明化疗药物杀伤肿瘤细胞的确切机制，为临床治疗提供理论依据亦成为化疗研究的热点问题。 紫杉醇是近年来出现的一类新的植物类抗癌药，由于其独特的作用机制和抗癌效果吸引了人们对它进行基础与临床的深入研究。有关紫杉醇治疗食管癌的临床研究已有若干报道，然而关于其作用的基础研究国内外尚不多见，尤其是以紫杉醇为主的联合用药的基础研究尚未见报道。 目前临床多采用以顺铂为基础的化疗方案，其疗效已获得了肯定。但仍有相当一部分患者疗效不理想。除食管癌自身特点外，化疗药物的明显毒副作用和癌细胞的耐药等问题也是重要的原因。因此，寻求较为可靠的客观指标评估、筛选抗肿瘤药物的敏感性是食管癌治疗中的重要课题之一。 细胞周期各时相的变化是一个连续的过程，在细胞周期的任一时相的生物合成被阻断，都可以使整个周期中断，研究药物对细胞周期的影响，可进一步了解药物的作郑州大学2003届硕士毕业论文多种化疗药物诱导人食管癌细胞凋亡及对其细胞周期的影响用机制，用于指导临床治疗。 基于上述考虑，本试验拟选用治疗食管癌的常用化疗药物顺铂(DDP)，5一氟脉嚓睫(5一FU)，紫杉醇(几xol)单药及常用的DDP+5一FU和新设计的井1’a xol+DDP联合化疗方案，利用人食管癌细胞株进行试验，分别从细胞周期及诱导细胞凋亡等方面分析研究，进一步阐明药物作用机制，为临床用药提供理论依据。材料与方法 1.细胞株选用人食管癌细胞株一109(Eca-109)为材料。 2.化疗药物选用5一氟脉嚓咤(5一FU)、顺铂(DDP)及紫杉醇c1’a x01)。3 .MTT比色分析法测定不同浓度处理组的细胞生长抑制率，选取合适流式检测浓度。4.流式细胞仪检测不同加药处理组的周期时相变化及凋亡情况。5.实验数据经SPSS 10.0统计软件处理，采用正态性检验，单因素方差分析，xZ检验，以。=0.05为检验水准。结果 1 .MTT法结果显示:不同浓度的DDP、5一FU厂1’a xol单用处理细胞48h，OD值与对照组以及与各处理组之间的差异均有统计学意义(P<0.05)，选取抑制率分别为20%一30%、50%、70%一80%的药物浓度作为流式细胞仪检测浓度，DDP为0.2 pg/ml，3 .2，g/ml，12.8 09加1;5一FU为3.13 09/ml，50，留ml，20009/ml;lhxol为0.00313。g/ml，o.025p留ml，0.2。留ml。DDP下1泊xol，DDp+s一FU两种方案处理细胞48h，OD值与对照组之间以及与各处理组之间的差异均有统计学意义(P<0 .01)。流式细胞仪检测浓度DDp+5一FU为0.1+1 .56，留ml，1 .6+25，留ml，6.4+100 0 g/ml;DnP+1妞xol为0.2+0.00313。岁血l，1.6+0.025，岁ml，12.8+o.Zpg/ml。结果表明:上述三种药物均可有效抑制Eca-109细胞的生长，随着化疗药物浓度的增高，细胞生长抑制率逐渐增高。 2.DDP、5一FU流式检测结果显示:DDP作用Eca-109细胞各处理组GZ从期百分数为12h:15.70%，16.44%，17.78%，24h:15.94%，17.51%，18.04%，48h:12.88%，1 5.56%，其升高与对照组相比有统计学意义(P<0 .01)。凋亡细胞百分数分别为12h:9.55%，10.52%，7.52%，24h:10.71%，x2.20%，9.62%，48h:9、63%，13.84%，其升高与对照组相比有统计学意义(P<0 .01)。表明DDP可将Eca-109细胞阻滞于GZ/M期并诱导细胞凋亡，随着药物浓度的增高，其阻滞率亦增高。5一FU诱导凋亡的细胞百分数分别为12h:10.01%，9.21%，18.88%，24h:12.70%，18.45%，48h:15.8%，20.13%，其升郑州大学2003届硕士毕业论文多种化疗药物诱导人食管癌细胞凋亡及对其细胞周期的影响高与对照组相比有统计学意义(P<0.01)。表明5一FU可诱导Eca-109细胞凋亡增加。 3厂1砍ol流式结果显示:几xol不同浓度组和不同时间组处理Eca一109细胞，GZ从百分数分别为12h:12.42%，16.40%，20.59%，24h:19.74%，21.37%，25.93%，48h:13.71%，14.79%，22.35%，其显著升高与对照组相比有统计学意义(P<0.01)，24h时间组各q/M期百分数较同一浓度的其它时间组明显升高有统计学意义(P<0.01)。Thxol诱导凋亡的细胞百分数分别为12h:6.55%，10.12%，10.200，0:24h:7.930，0，10.540，0，9.39%:48h:9.77%，10.95%，10.50%，其升高与对照组相比有统计学意义(P<0.01)。结果表明:Thxol可将Eea一109细胞阻滞于q叔期，24h达到高峰，lbxol可诱导Eca一109细胞凋亡率增加。 4.了hxol十DDP联用流式结果显示:q服期百分数?