【摘 要】
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过氧化物还原酶(Peroxiredoxins Prx)是生物体内普遍存在的一个重要的具有抗氧化活性和调节信号转导的抗氧化蛋白家族的一个新成员.该文以青岛文昌鱼的硫氧还蛋白过氧化物酶(
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过氧化物还原酶(Peroxiredoxins Prx)是生物体内普遍存在的一个重要的具有抗氧化活性和调节信号转导的抗氧化蛋白家族的一个新成员.该文以青岛文昌鱼的硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase TPx)为研究对象,综合应用分子生物学、蛋白质化学和生物信息学等研究方法和技术,从核酸水平和蛋白质水平对其进行了较为系统的研究.以期阐明过氧化物酶在生物体内的抗氧化反应机制及其在生命活动中的重要性与特殊性.通过对青岛文昌鱼卵巢cDNA表达文库的序列测定和生物信息学分析,获得了一个编码文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶(Bbt-TPx)的全长cDNA序列.它的读码框编码198个氨基酸残基的蛋白.它具有典型的2-Cys过氧化物还原酶的两个具有活性的半胱氨酸残基,属于过氧化物还原酶中的硫氧还蛋白过氧化物酶.以Bbt-TPx的全长cDNA中的特异序列为引物,不同发育阶段的文昌鱼(原肠胚、神经胚、幼虫、成体)和不同组织部位(消化道、鳃、精巢、卵巢、脊索、肌肉)的总cDNA一链为模板,做RT-PCR反应检测TPx的转录模式.进一步构建了pET32a(+)M-Bbt-TPx原核表达载体,进行了诱导表达,并摸索了重组Bbt-TPx蛋白在大肠杆菌中的表达条件,获得了具有良好可溶性的重组蛋白.在获得重组Bbt-TPx蛋白的基础上,对其活性、作用机制和结构进行了研究.总之,青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶的发现及对其序列分析、转录模式、蛋白表达、活性、反应机制和结构等方面的研究,为进一步深入研究该蛋白特别是该蛋白天然免疫和抗氧化的机制奠定了良好的基础.
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