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目的:(1)了解江苏省性病门诊患者淋病奈瑟菌(又称淋球菌,Neisseria gonorrhoeae)及支原体的感染状况,通过描述其分布特征,分析影响流行的主要因素。(2)对病原体流行株进行抗生素耐药性研究,为临床治疗提供科学用药的依据。(3)检测耐药基因,观察其分布状况,并分析耐药机制。研究方法:(1)应用T-M培养基分离培养淋病奈瑟菌,经Gram’s染色、氧化酶试验及API NH试剂盒进行鉴定。用法国梅里埃支原体鉴定药敏试剂盒进行解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)与人型支原体(Mycoplasma hominis,Mh)的鉴定和药敏试验,结合流行病学调查资料,应用χ2检验、秩和检验、非条件Logistic回归进行统计分析。(2)随机抽取95株淋病奈瑟菌,采用琼脂稀释法检测头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟、大观霉素、左氧氟沙星、青霉素、四环素、环丙沙星对其的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)。(3)根据药敏结果,从95株淋病奈瑟菌中分层随机抽取48株,用PCR扩增青霉素耐药基因TEM和四环素耐药基因tetM;随机抽取20株,扩增氟喹诺酮耐药基因gyrA后测序,用DNAStar软件将标本序列与标准菌株的序列进行比对分析。分别扩增对大观霉素敏感和耐药的淋病奈瑟菌16S rRNA基因并测序分析。研究结果:(1)江苏省性病门诊就诊人群淋病奈瑟菌感染率为23.3%,解脲支原体和/或人型支原体检出率为28.9%,人型支原体主要以混合感染的形式存在。淋病奈瑟菌感染率存在地区、性别差异,徐州感染率低于南京和无锡,男性感染率高于女性。支原体检出率存在性别差异,女性检出率高于男性。(2)多因素Logistic回归分析,近期婚外性接触、性伴有性病两因素增加淋病奈瑟菌感染的机会,女性则减少感染机会。而支原体的检出率与女性及年龄小于等于25岁有关,二者增加感染支原体的风险。(3)淋病奈瑟菌对目前的一线药物(头孢类药物和大观霉素)普遍敏感,其中大观霉素的耐药率仅为1.1%。但对检测的其它药物,耐药率很高,对青霉素、四环素、环丙沙星的耐药率分别为68.4%、78.9%、100%。(4)不论单一感染还是混合感染,解脲支原体和人型支原体均对原始霉素、交沙霉素、强力霉素较为敏感,敏感率在90%以上;对环丙沙星、氧氟沙星均有不同程度耐药,且耐药率高,达40%以上。单一解脲支原体对大环内酯类药物(阿奇霉素、克拉霉素、红霉素)较为敏感,敏感率均在88%以上。但单一人型支原体对此类药物敏感率低,其耐药率均高于60%,甚至高达100%,并由此而影响支原体混合感染的耐药状况。(5)三地淋病奈瑟菌耐药谱一致。三地单一解脲支原体耐药谱一致,单一人型支原体耐药谱也基本一致(阿奇霉素除外)。(6)产青霉素酶淋病奈瑟菌(Penicillinase-producing Neisseria gonorrhoeae,PPNG)TEM基因检出率明显高于非PPNG株。tetM基因在质粒介导的抗四环素淋病奈瑟菌(Plasmid-mediated tetracycline-resistant Neisseria gonorrhoeae, TRNG)株检出率亦高于非TRNG株。而20株淋病奈瑟菌gyrA序列与标准菌株比较,存在以下四种突变形式:(1)gyrA编码的91位丝氨酸改变为苯丙氨酸和95位天冬氨酸改变为甘氨酸;(2)91位丝氨酸改变为苯丙氨酸和95位天冬氨酸改变为丙氨酸;(3)91位丝氨酸改变为苯丙氨酸和95位天冬氨酸改变为天冬酰胺;(4)91位丝氨酸改变为苯丙氨酸,92位丙氨酸改变为脯氨酸。本研究主要以91位和95位氨基酸的联合改变为主,占95%。大观霉素耐药株的16S rRNA基因第1164位发生C→T的突变。支原体的tetM基因检测显示中敏株与耐药株的检出率高于敏感株。研究结论:(1)与以往资料比较,淋病奈瑟菌与支原体感染可能有从性活跃年龄向高年<WP=5>龄组、从低文化程度向高文化程度人群扩散的趋势。(2)近期有婚外性接触史、性伴侣有性病增加淋病感染的风险, 女性由于危险行为较男性少,感染的风险也较小。而支原体检出率与女性及年龄小有关,女性及年龄小于等于25岁两因素增加支原体感染风险。(3)淋病奈瑟菌对一线药物敏感,对以往常规药物青霉素、四环素、环丙沙星耐药严重。支原体对原始霉素、交沙霉素、强力霉素敏感,对其它药物的药敏情况则因支原体种类而有所不同。(4)耐药基因在菌株中流行较广泛。淋病奈瑟菌对大观霉素耐药是由于16S rRNA基因的突变,由于细菌单一位点的突变即可引起对大观霉素的耐药,因而应重视对大观霉素的耐药监测和研究。本研究耐大观霉素株16S rRNA突变为国内首家报道, 该基因序列已成功登录美国GenBank,登录号为AY573194。