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目的:探讨牛蒡苷(Arctiin,ARC)对弓形虫热休克蛋白 70(T.g.HSP70)诱导弓形虫感染肝细胞NCTC 1469损伤的保护作用及其作用机制。研究方法:通过体外实验培养小鼠正常肝细胞NCTC 1469,以2.5×105的细胞密度均匀铺在6 cm培养皿中,随机分为正常组(Normal),弓形虫感染组(T.gondii),弓形虫热休克蛋白70组(T.g.HSP70),模型组(T.gondii+T.g.HSP70),以及牛蒡苷低、中、高三个不同剂量组(ARC 25 μM,50 μM,100 μM)。当 NCTC 细胞贴壁生长至 60-70%时,除正常组与弓形虫热休克蛋白70组外,其余组按弓形虫:细胞为5:1的比例感染RH株速殖子(1.25×106个/皿),感染4 h后,洗去游离的弓形虫,换液加药治疗36h,除正常组与T.gondii组外,其余各组在收集细胞前加入T.g.HSP70诱导30 min,观察各组细胞变化,收集细胞上清和沉淀。用MTT法检测ARC和T.g.HSP70对肝细胞NCTC 1469的毒性;用ELISA法检测细胞上清中谷氨酸-丙酮酸转氨酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST);用H/E染色法在显微镜下观察肝细胞的病理变化;用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞中Toll样受体4(TLR4),髓样分化因子88(MyD88),磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶(p-MAPKs),核转录因子(NF-κB),磷酸化的胞浆型磷脂酶A2(p-cPLA2),血小板活化因子(PAF)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等蛋白的表达;用免疫荧光法在荧光显微镜下观察肝细胞中NF-κB基因的核转录变化;用RT-PCR法检测细胞中T.g.HSP70和SAG1 mRNA的表达水平。结果:MTT细胞毒性实验结果表明:ARC(25 μM,50 μM,100 μM)对正常肝细胞均无毒性,T.g.HSP70(1μg/rnL,2 μg/mL,3μg/mL)对肝细胞均无毒性。转氨酶实验结果表明:与正常组相比,T.gondii组ALT、AST水平均明显升高(P<0.05,P<0.01);T.g.HSP70组无显著性差异,比较没有统计学意义(P>0.05);而模型组转氨酶水平显著升高(P<0.001,P<0.001),并与弓形虫感染组相比有显著性差异(P<0.001,P<0.01)。结果表明,T.g.HSP70对正常肝细胞无损伤作用,但能够加重弓形虫感染的肝细胞受损。而ARC组可呈一定剂量依赖性的降低模型组中ALT、AST水平,其中高剂量组与模型组相比有明显的抑制作用(P<0.001)。H/E染色结果表明:正常组肝细胞排列整齐,核仁清晰可见。弓形虫感染组,细胞中存在少量的弓形虫,肝细胞有轻度受损。T.g.HSP70组与正常组相比无明显变化。模型组中,细胞中存在大量弓形虫,核仁缩小,肝细胞严重受损。而经过不同浓度的ARC干预之后,细胞中的弓形虫数量明显减少,肝细胞排列相对整齐,其中高浓度组几乎接近于正常组。Western Blotting实验结果表明:与正常组相比,模型组中TLR4、MyD88、p-MAPKs(p-p38、p-ERK)、核蛋白中 NF-κB 的核转录、cPLA2、PAF的活化和炎症因子TNF-α的产生明显增强(P<0.001,P<0.05),同时促进胞浆蛋白IκB-α的降解(P<0.001);而ARC组可明显抑制模型组中TLR4、p-MAPKs(p-p38,p-ERK)、p-cPLA2、PAF 及 TNF-α等蛋白的表达和NF-κB的核转录,激活IκB-α的表达(P<0.05)。免疫荧光结果表明,在模型组中NF-κB蛋白主要存在于细胞核中;而ARC可明显抑制T.g.HSP70诱导的NF-κB核转录。RT-PCR结果表明:与正常组相比,模型组肝细胞中T.g.HSP70 mRNA和SAG1 mRNA转录水平均明显增加(P<0.001,P<0.001);与模型组相比,ARC组可明显抑制T.g.HSP70 mRNA 和 SAG1 mRNA 的转录水平(P<0.001,P<0.001)。结论:牛蒡苷对T.g.HSP70诱导弓形虫感染的肝细胞损伤具有很好的保护作用;其作用机制是抑制T.g.HSP70通过TLR4/MAPK/NF-κB信号通路诱导炎症因子的产生。