与肝癌发生相关的SEC14基因家族新成员CRALBPL的克隆和功能研究

• 作 者: 赵硕
• 机 构: 复旦大学
• 出 处: 复旦大学
• 发表日期: 2007年期
• 关键词: 肝癌 克隆技术 细胞视黄醛结合蛋白 SEC14基因

SEC14结构域(类似Sec14p的脂质结合结构域)是一个进化上保守的蛋白结构域，多发现于分泌蛋白，比如酿酒酵母磷脂酰肌醇转移蛋白Sec14p，以及脂质调控蛋白，比如GTP酶激活蛋白、鸟苷酸交换因子和神经纤维瘤蛋白。
我们从人胎脑cDNA文库中克隆到一条含有SEC14结构域的人类新基因类细胞视黄醛结合蛋白(CRALBPL)。CRALBPL在16种成人正常组织中的表达谱显示其只在脑中有明显表达，而在我们实验中使用的7种人类肿瘤细胞系中CRALBPL全部都有明显表达，尤其是在胃腺癌、横纹肌瘤、肝细胞癌和前列腺癌中表达量较高。我们进一步研究发现相对于人类正常肝细胞系，CRALBPL在4种人类肝癌细胞系中的表达量明显升高。通过比较肝癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织样本中CRALBPL的表达情况，我们得到了同样的结果。我们的这些实验结果显示出CRALBPL在肝癌组织中表达量上调，提示其可能跟人类肿瘤发生有一定的相关性。
我们还利用Ga14酵母双杂交系统筛选了CRALBPL的相互作用蛋白，找到了一个重要的相互作用蛋白人类酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白β多肽(YWHAB)。YWHAB参与了包括细胞周期调控在内的多条信号通路，暗示CRALBPL可能通过与YWHAB的相互作用对细胞周期调控产生影响，进而在肿瘤发生过程中发挥作用。为了证明CRALBPL和YWHAB的相互作用，我们(1)原核表达了GST-CRALBPL和6xHis-YWHAB，并在体外进行了GST、pull-down实验；(2)研究了两者在AD293和L-02细胞系中的亚细胞定位及荧光共定位；(3)在AD293和L-02细胞系中进行了CRALBPL和YWHAB的免疫共沉淀实验。虽然实验结果不甚理想，但是我们仍然得到了一些证明CRALBPL和YWHAB相互作用的线索。此外，我们还利用流式细胞仪研究了过表达CRALBPL对细胞周期的影响。